[发明专利]多重PCR检测脑炎脑膜炎相关病毒用引物组和试剂盒

权利要求书

1.一种多重PCR检测脑炎相关病毒用引物组，其中，该引物组包括SEQ ID NO.1和3-22所示的引物；所述脑炎相关病毒包括乙型脑炎脑膜炎病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎脑膜炎病毒、流感病毒和腺病毒。

2.根据权利要求1所述的引物组，其中，所述引物组还包括SEQ ID NO.23-24所示的引物。

3.用于非诊断目的的多重PCR检测脑炎相关病毒的检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)提取待测样本的总核酸；

(2)对所述总核酸进行逆转录获得PCR模板；用权利要求1或2所述的引物组对所述PCR模板进行多重PCR扩增，获得多重PCR扩增后的物料；

(3)对所述多重PCR扩增后的物料进行核酸电泳检测，得到核酸电泳检测的结果；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有581bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有乙型脑炎脑膜炎病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有189bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有腮腺炎病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有221bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有肠道病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有378bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有单纯疱疹病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有330bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有麻疹病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有123bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有呼吸道合胞病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有277bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有西尼罗病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有505bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有蜱传脑炎脑膜炎病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有150bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有流感病毒；

如果核酸电泳检测的结果显示所述多重PCR扩增后的物料中含有402bp的扩增产物，则指示所述待测样本中含有腺病毒。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，SEQ ID NO.3-22所示的引物的最终使用浓度各自为0.1-0.8μM，SEQ ID NO.1所示的引物的最终使用浓度为0.4-0.8μM。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其中，步骤(2)的反应条件包括如下a-i的程序：

a：49-51℃，28-32min；

b：94-96℃，13-18min；

c：94-96℃，28-32s，

d：54-56℃，28-32s，

e：71-73℃，58-62s，进行10个c-e的循环；

f：94-96℃，28-32s，

g：49-51℃，28-32s，

h：71-73℃，59-61s，进行30个f-h的循环；

i：71-73℃，5-10min。

6.根据权利要求3或4所述的检测方法，其中，所述核酸电泳检测包括核酸凝胶电泳和/或核酸毛细管电泳。

7.一种多重PCR检测脑炎相关病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1或2所述的多重PCR引物组、逆转录酶和DNA聚合酶；所述脑炎相关病毒包括乙型脑炎脑膜炎病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎脑膜炎病毒、流感病毒和腺病毒。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液和dNTP。

9.权利要求1或2所述的引物组在制备检测脑炎相关病毒的试剂盒中的用途；其中，所述脑炎相关病毒包括乙型脑炎脑膜炎病毒、腮腺炎病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎脑膜炎病毒、流感病毒和腺病毒。