[发明专利]全程C‑反应蛋白荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球

权利要求书

1.一种全程C-反应蛋白荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）取表面活性剂加入pH为8~10的碳酸缓冲液中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺；

2）取氨基表面的荧光乳胶微球的分散液，以碳酸缓冲液调pH至8~10后，加入到步骤1）所得的混合物中，于20~30℃下搅拌反应2~4小时，反应完毕后，离心去除上清液，得到活化荧光乳胶微球，氨基表面的荧光乳胶微球为氨基聚苯乙烯荧光微球；

其中，所述表面活性剂为氨基酸型表面活性剂、聚乙二醇脂肪酸酯和硬脂酸盐的混合物，三者的重量比为1~5:1~2:0.5~3；所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的质量比为500~2000:1；所述氨基酸型表面活性剂为月桂酰盐、N-酰基谷氨酸盐或十二烷基二亚甲基氨基二甲酸盐中的一种或其两种以上的组合。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述硬脂酸盐为硬脂酸的钾、钠、铵盐以及三乙醇铵盐中的一种或其两种以上的组合。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述氨基酸型表面活性剂为月桂酰谷氨酸钠；所述硬脂酸盐为硬脂酸钠；所述聚乙二醇脂肪酸酯为聚乙二醇单月桂酸酯。

4.权利要求1~3任一项所述的制备方法得到的全程C-反应蛋白荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球。

5.权利要求4所述的全程C-反应蛋白荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球的标记物工作液的制备方法，其特征在于，取全程C-反应蛋白荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球分散于微球缓冲液中，得到标记物工作液；表面活化的荧光乳胶微球在标记物工作液中所占的比例为0.5~2wt%；

其中，微球缓冲液的制备方法为：将BSA、生物防腐剂、雷米邦A和甜菜碱溶于0.01M、pH7.4的磷酸缓冲液中；所述 BSA、生物防腐剂、雷米邦A和甜菜碱在所述微球缓冲液中的浓度均为0.1wt%。

6.全程C-反应蛋白荧光免疫层析试纸条的标记物垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:

1）活化荧光乳胶微球标记的兔IgG的制备：取权利要求5所述制备方法得到的标记物工作液，离心，弃上清液后，用标记缓冲液复溶，并且同时加入碳二亚胺和兔IgG，搅拌反应，然后离心，弃上清液，最后用标记稀释液复溶；

2）活化荧光乳胶微球标记的标记用全程C-反应蛋白单克隆抗体的制备方法：取权利要求5所述制备方法得到的标记物工作液，离心，弃上清液后用标记缓冲液复溶，并且同时加入碳二亚胺和标记用全程C-反应蛋白单克隆抗体，搅拌反应，然后离心，弃上清液，最后用标记稀释液复溶；

3）取步骤1）所得分散液和步骤2）所得分散液，混合，喷涂于玻璃纤维之上，烘干；

所述标记缓冲液的配方为：碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g，溶于1000mL水中；所述标记稀释液的配方为：柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠1g，溶于1000mL水中。

7.一种全程C-反应蛋白荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括权利要求6所述的方法制备得到的标记物垫、包被垫和吸收垫，其中所述标记物垫搭接于包被垫的一端上，吸收垫搭接于包被垫的另一端上，包被垫上设有质控线和检测线，质控线上包被有羊抗兔IgG的抗体，检测线上包被有全程C-反应蛋白单克隆抗体。