[发明专利]两种大环内酯类化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于农药技术领域，具体涉及一类具有杀虫活性的大环内酯类抗生素，及其制备方法。

背景技术

米尔贝霉素是微生物天然产物农药，己有数据表明它是当今世界上最优良的杀瞒剂之一。美国环保署认定其为低危险性杀虫剂，荷兰批准其为"GNO"(作物生产中的天然产物)。目前商品化最多的是米尔贝霉素A3/A4、莫西克汀、米尔贝肟。该类药物在农牧业上对寄生虫类有较好的防治效果，且具有广谱杀虫活性,如螨类、蚜虫、黄褐天幕毛虫、肠道寄生虫及其他危害农业及畜牧业的寄生虫。其作用特点包括用量少,反应强烈且对人安全、无毒害，不污染环境,对天敌无害,也不易产生抗性。作为抗寄生虫药，米尔贝霉素作用机制是，其作为一种γ-氨基丁酸(GABA)的激动剂，进而引发突触前的GABA释放，影响Cl^-通道的通透性，进而阻断神经递质的传导，从而引起虫体神经肌肉麻痹至死。

发明内容

冰城链霉菌Streptomyces bingchenggensis是本实验室从土壤中分离得到的米尔贝霉素产生菌。与其它米尔贝霉素产生菌Streptomyces hygroscopicus subsp.aureolacrimosus和Streptomycesgriseochromogenes一样，冰城链霉菌Streptomyces bingchenggensis除了产生米尔贝霉素A3/A4外，还产生其它米尔贝霉素系列化合物及其它的次级代谢产物。通过对Streptomyces bingchenggensis进行常温常压等离子诱变，我们获得了一株米尔贝霉素A3/A4高产菌株Streptomyces bingchenggensis BC-120-4(Hai-Yan Wang,Ji Zhang,Yue-Jing Zhang,Bo Zhang,Chong-Xi Liu,Hai-Rong He,Xiang-Jing Wang,Wen-Sheng Xiang.Combined application of plasma mutagenesis and gene engineering leads to 5-oxomilbemycins A3/A4as main components from Streptomyces bingchenggensis[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2014,98:9703-9712)。因此，对该突变菌株发酵代谢产物的分离纯化可以发现新型、更高生物活性的米尔贝霉素结构类似物，为米尔贝霉素生物合成机制的研究提供新的视角，也为新型米尔贝霉素的药物开发提供丰富的实验材料。

本发明主要涉及由冰城链霉菌突变菌株(Streptomyces bingchenggensis BC-120-4)得到的新的米尔贝霉素类化合物，及它们的制备方法和应用。

本发明的目的是提供一类具有强杀虫活性的大环内酯类化合物。

本发明的另一个目的是提供这类大环内酯类化合物的制备方法。

本发明提供的两种大环内酯类化合物的分子结构分别如下：

所述化合物的制备方法是将冰城链霉菌突变菌株Streptomyces bingchenggensis BC-120-4依次经斜面培养和种子培养，再发酵后分离纯化。

所述的斜面培养是用去离子水配制斜面培养基，于121℃下灭菌20min，接菌后置于28℃培养箱中，培养8～9天，将培养得到的孢子用无菌水配置成10⁷～10⁸c.f.u.ml^-1的孢子悬液备用；

其中，所述斜面培养基组成(g/L)：葡萄糖10～12，麦芽糖3～4，酵母抽提粉3～4，K₂HPO₄·3H₂O 0.5～0.6，MgSO₄·7H₂O0.5～0.6，NaCl 0.5～0.6，KNO₃1.0～1.2，琼脂粉20～25，pH值为7.0～7.2。

所述的种子培养是用蒸馏水配制种子培养基，于121℃下灭菌20min，向菌种斜面上加入10ml无菌水，用已灭菌的接种环刮下孢子制成孢子悬液，使其浓度为10⁷～10⁸c.f.u.ml-¹，然后取2ml孢子悬液接种于种子培养摇瓶中，种子摇瓶装液量为25ml/250ml，置于250rpm旋转式摇床，在28℃条件下培养46～52h；