[发明专利]一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种重组载体，其特征在于，通过将编码猪圆环病毒II型Cap蛋白的核苷酸插入到马克斯克鲁维酵母表达载体所构建；

所述重组载体包括马克斯克鲁维酵母自主复制序列、马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子序列、编码猪圆环病毒II型Cap蛋白的基因序列、马克斯克鲁维酵母菊粉酶终止子序列、大肠杆菌复制序列和抗性筛选基因、和营养缺陷筛选基因,所述马克斯克鲁维酵母表达载体的DNA序列为SEQ ID No.5。

2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，由马克斯克鲁维酵母组成型菊粉酶启动子和终止子控制猪圆环病毒II型Cap蛋白的转录翻译。

3.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，编码所述猪圆环病毒II型Cap蛋白的核苷酸系列为SEQ ID No.2所示序列。

4.一种马克斯克鲁维酵母重组工程菌株，其特征在于，由权利要求1所述重组载体转化马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株所构建。

5.根据权利要求4所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母的营养缺陷型菌株，为马克斯克鲁维酵母菌敲除部分或全部特定营养基因所得。

6.根据权利要求5所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株，其特征在于，所述特定营养基因为URA3基因。

7.根据权利要求5所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母菌为CGMCC No.10621。

8.一种制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的方法，其特征在于，包括：

将编码猪圆环病毒II型Cap蛋白的核苷酸插入到马克斯克鲁维酵母表达载体，构建权利要求1所述重组载体；

将重组载体转化马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株，构建重组酵母；

重组酵母培养发酵，进行Cap蛋白的表达；

利用Cap蛋白在酵母细胞内自组装成猪圆环病毒II型病毒样颗粒；

收集培养发酵的菌，分离纯化获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒；

以所述猪圆环病毒II型病毒样颗粒为活性成分或活性成分之一，制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述分离纯化包括：所收集的培养发酵的菌，破裂后收集释放的病毒样颗粒，凝胶层析纯化猪圆环病毒II型病毒样颗粒。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述重组酵母培养所用培养基中含有葡萄糖、硫酸铵、硫酸镁、磷酸二氢钾。

11.一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，其特征在于，由权利要求6所述马克斯克鲁维酵母重组工程菌株培养发酵、分离纯化获得的猪圆环病毒II型病毒样颗粒为活性成分或活性成分之一。

12.根据权利要求11所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，其特征在于，所述疫苗选自液体注射剂、注射粉剂、注射片剂中的一种或几种。

13.根据权利要求11所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，其特征在于，所述疫苗包括佐剂，所述佐剂选自水包油、油包水、水包油包水佐剂中的任意一种或几种。

14.根据权利要求13所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，其特征在于，所述佐剂选自ISA201水包油包水矿物油佐剂、IMS1313水溶性纳米佐剂 、GEL01新型纳米侳剂中的任意一种或几种。

15.一种权利要求11所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒在制备疫苗中的应用，其特征在于，所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒用于制备预防和/或治疗猪圆环病毒II型病毒引发的疾病的药物和/或疫苗，所述猪圆环病毒II型病毒引发的疾病选自：断奶仔猪多系统衰竭综合症、猪皮炎肾病综合症、仔猪先天性震颤和母猪繁殖障碍中的任意一种或几种。