[发明专利]一种C5aR基因敲除小鼠cGVHD模型的建立方法

权利要求书

1.一种C5aR基因敲除小鼠cGVHD模型的建立方法，通过以下步骤实现：

(1)以高龄B10.D2(Hc1 H2d H2-T18c)雄性小鼠作为供鼠；

(2)以高龄C5aR-/-(C.129S4(B6)-C5ar1tm1Cge/J)雌性小鼠作为受鼠；

(3)受鼠接受全身照射(TBI)预处理后，将获自供鼠的骨髓细胞BMC悬液及脾细胞SpC悬液注射至受鼠；

所述供鼠及受鼠均采用16周龄小鼠。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，供鼠BMC悬液的制备如下：以颈椎脱臼法处死供鼠后，放入75％乙醇中浸泡3～5min，无菌剥离股骨和胫骨，用RPMI1640培养液冲洗骨髓腔，收集含有骨髓的冲洗液制成单细胞悬液，过滤后用红细胞裂解液破除红细胞，RPMI 1640培养液洗涤3-4次，计数并用RPMI 1640培养液重悬细胞，调整至4×10^7/0.15mL细胞浓度备用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，供鼠SpC悬液的制备如下：以颈椎脱臼法处死供鼠后，放入75％乙醇中浸泡3～5min，无菌取出脾脏，去除脾脏周围系膜组织，移入平皿内用RPMI 1640培养液洗涤若干次，碾磨，收集细胞冲洗液制成单细胞悬液，过滤后用红细胞裂解液破除红细胞，用RPMI1640培养液洗涤3-4次，计数并用RPMI 1640培养液重悬细胞，调整至4×10^6/0.15mL细胞浓度备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，移植当日受鼠接受直线加速器30x30照射野，680cGy，698跳，源皮距为100cm，单次全身照射预处理，照射后立即补充饮水，休息4～6小时后经尾静脉注射终体积为0.3mL的由0.15mL BMC悬液和0.15mLSpC悬液组成的注射液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，注射给受鼠的BMC悬液的用量为4×10^7个细胞数，SpC悬液的用量为4×10^6个细胞数。