[发明专利]一种产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201610817882.X | 申请日： | 2016-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN107815424B | 公开（公告）日： | 2021-03-05 |
| 发明（设计）人： | 花强;韦柳静;曹选;吕预备;陈骏 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P5/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;蒋舫玮 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 柠檬 解脂耶氏 酵母 基因工程 及其 应用 | ||
1.一种产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，其是将含有优化的基因LS和优化的基因NDPS1的重组载体转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母（
2.如权利要求1所述的产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，其是将质粒pINA1269-HMG1转化转化体A后构建而成，所述质粒pINA1269- HMG1的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:3所示；所述转化体A是将所述质粒pINA1312LN转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母（
3.如权利要求1所述的产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，其是将质粒pINA1269-HMG1-ERG12转化转化体A后构建而成，所述质粒pINA1269-HMG1-ERG12的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:4所示；所述转化体A是将所述质粒pINA1312LN转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母（
4.一种产柠檬烯的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：培养如权利要求1~3任一项所述的产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌，添加十二烷进行两相发酵得发酵液，萃取发酵液的十二烷相。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的培养还添加丙酮酸。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸的浓度为2~8g/L，所述浓度为所述丙酮酸的质量与添加所述丙酮酸前所述培养的体系的体积之比。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸的浓度为4g/L，所述浓度为所述丙酮酸的质量与添加所述丙酮酸前所述培养的体系的体积之比。
8.如权利要求4~7任一项所述的方法，其特征在于，所述十二烷的浓度为2~10%，所述百分比为所述十二烷与添加所述十二烷前所述发酵液的体积百分比。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述十二烷的浓度为为6~8%，所述百分比为所述十二烷与添加所述十二烷前所述发酵液的体积百分比。
10.如权利要求1~3任一项所述的产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌在制备柠檬烯中的应用。
11.一种制备产柠檬烯的解脂耶氏酵母基因工程菌的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：
（1）构建含有优化的基因LS和优化的基因NDPS1的重组载体，所述优化的基因LS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No:1所示；所述优化的基因NDPS1的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo:2所示；所述重组载体为质粒pINA1312LN，所述质粒pINA1312LN的核苷酸序列如序列表SEQ ID No: 5所示；
（2）将步骤（1）制备的重组载体转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母（
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