[发明专利]一种由海洋青霉属真菌大规模制备青霉酸的方法

说明书

本发明属于海洋微生物资源利用领域，具体涉及一种由海洋青霉属真菌大规模发酵制备青霉酸的方法。包括如下步骤：(1)先在菌种培养基中对海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1‑6进行菌种培养；(2)再在发酵培养基中对步骤(1)中的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1‑6进行发酵培养；(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂萃取，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用有机溶剂浸提，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离得粗品；(4)步骤(3)得到的粗品经重结晶或色谱分离，得到青霉酸纯品，纯度在98.0％以上，产量高达500～650mg/L。

技术领域

本发明属于海洋微生物资源利用领域，具体涉及一种由海洋青霉属真菌大规模发酵制备青霉酸的方法。

背景技术

青霉酸是一种霉菌毒素，存在线性取代酮酸和内酯两种互变形式，其分子量为170.16,易溶于热水、乙醇、乙醚和氯仿。

关于青霉酸药理活性及其毒性的报道较多，据报道青霉酸具有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤活性、抑制乙酰胆碱酶、抑制NF-κB活化(《HETEROCYCLES》，2008年，第76卷第2期，第1561－1569页)等药理活性，此外，青霉酸对人和动物都具有毒性，主要引起心脏、肝脏和肾脏等器官的损伤，并具有潜在的致癌性。

现有技术中青霉酸多由粮食或饲料霉变产生，即多为陆地真菌产生；近年来有报道通过海洋曲霉属真菌与细菌共培养可产生青霉酸(《微生物学报》，2014年，第54卷第11期，第1289－1295页)，还有报道α-蒎烯提高海洋曲霉属真菌中青霉酸产量(《中山大学学报(自然科学版)》，2011年，第50卷第2期，第66-69页)。然而目前并没有利用海洋青霉属真菌制备青霉酸的报道，更没有利用海洋青霉属真菌大规模制备青霉酸的报道。为了进一步研究青霉酸的毒性及其药理活性，同时对其进行结构改造，大量的青霉酸原料是必需的。因此，开发一种操作简单，原料易得的大规模制备青霉酸的方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6大规模制备青霉酸或其药学上可接受的盐的方法。所述海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2016年7月5日；保藏编号：CGMCCNo.12762；分类命名：青霉Penicillium sp.。

本发明提供一种由海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6制备青霉酸或其药学上可接受的盐的方法，包括如下步骤：

(1)先在菌种培养基中对海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6进行菌种培养；

(2)再在发酵培养基中对步骤(1)中的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6进行发酵培养；

(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂A萃取2～4次，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用有机溶剂B浸提2～4次，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行色谱分离得粗品；

(4)步骤(3)得到的粗品经重结晶或色谱分离，得到青霉酸纯品；

其中所述菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水，发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。