[发明专利]氟尿嘧啶疗效相关基因基因多态性检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种氟尿嘧啶疗效相关基因(OPRT、MTHFR和DPYD)基因多态性检测试剂盒，该试剂盒用于检测基因多态性的引物，各引物如下所示：

2.如权利1要求所述的氟尿嘧啶疗效相关基因(OPRT、MTHFR和DPYD)基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液包括3’→5’外切酶活性高保真Taq酶，1.0-5.0mM的MgCl₂，1.0-5.0mM的dNTPs，即dATP，dUTP，dGTP，dCTP各1.0-5.0mM，SYBR Green I。

3.一种氟尿嘧啶疗效相关基因(OPRT、MTHFR和DPYD)基因多态性检测方法，包括以下步骤：

(1)提供如权利要求1中所述的引物；

(2)待测样品的处理和模板的提取；

(3)配制荧光定量PCR反应体系；

(4)利用ARMS引物区分野生型和突变型基因序列，通过SYBR Green染料和扩增产物的杂交，检测反应体系的SYBR强度来判定检测结果。SYBR为检测信号，以SYBR信号达到设定的阈值所需的的循环次数Ct值作为判断标准，Ct值小于32为阳性，Ct值大于35为阴性，Ct值介于32到35之间为弱阳性。

4.如权利3所述的一种检测人类OPRT、MTHFR和DPYD基因多态性的方法，其特征在于：步骤(3)所述的待测样品包括手术切除的新鲜病理组织，甲醛固定石蜡包埋的病理组织，石蜡切片，全血，血浆，血清，胸腔积液。

5.如权利3要求所述的一种氟尿嘧啶疗效相关基因(OPRT、MTHFR和DPYD)基因多态性检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的PCR体系中各组分终浓度及含量如下：

6.如权利3要求所述的一种氟尿嘧啶疗效相关基因(OPRT、MTHFR和DPYD)基因多态性检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的PCR反应条件为：95℃10分钟，40个循环：95℃10秒，60℃15秒。