[发明专利]一种基于宿主-肠道微生物互作基因的猪粪便污染特异性分子标记1-38及其检测方法有效
申请号: | 201610845794.0 | 申请日: | 2016-09-23 |
公开(公告)号: | CN106399303B | 公开(公告)日: | 2019-02-05 |
发明(设计)人: | 帅江冰;傅玲琳;张晓峰;莫虹斐;曾若雪;何永强 | 申请(专利权)人: | 浙江省检验检疫科学技术研究院;浙江工商大学 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/04 |
代理公司: | 杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 | 代理人: | 王从友 |
地址: | 310016 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 宿主 肠道微生物 互作基因 猪粪 特异性分子标记 富集 粪便污染源 竞争性杂交 特异性基因 污染物检测 分子标记 功能分类 宏基因组 基因片段 基因文库 特异性强 灵敏度 检测 靶点 靶向 构建 菌群 文库 污染 筛选 监测 | ||
1.一种检测猪粪便污染特异性分子标记1-38的引物和探针组合物,其特征在于,扩增该分子标记的上下游引物和探针构成如下:
上游引物:GGAGGTGGTTAAGCCGATATGTT
下游引物:GCCCCTTTCTTGATACTTTGGA
探针:Fam-AAACTGATTGGAGAAGAATACAGGCG-Tam。
2.一种基于宿主-肠道微生物互作基因的猪粪便污染的检测方法,其特征在于:该方法采用权利要求1所述的引物和探针组合物与被检测样品混合,进行荧光PCR反应,在每个循环延伸结束后读数;样品无Ct值并且无扩增曲线,表示样品中无猪粪便污染;样品扩增Ct值≤35, 且出现典型的扩增曲线,表示样品中存在猪粪便污染;样品Ct值>35的样本建议重做,重做结果无Ct值者为阴性,否则为阳性。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于:引物和探针浓度分别为0.2 μM和0.3μM。
4.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于荧光PCR反应条件为:95℃预变性30s,40个循环的95℃变性5s和60℃退火延伸30s。
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