[发明专利]基于组织培养的多刺老鼠簕快速繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁育方法，尤其是涉及一种基于组织培养的多刺老鼠簕快速繁育方法。

背景技术

多刺老鼠簕为爵床科老鼠筋属植物，多年生草本植物，株高70～100cm，叶广卵圆形或长椭圆形，1～2回羽状深裂。穗状花序，小花较密集，紫色，花期6-7月。多刺老鼠簕因其花型独特，耐荫性强，可大面积种植，是林下地被植物的优良材料。作为优良园林植物，因其观赏性、抗逆性、新颖性逐渐受到大家的认可。多刺老鼠簕可播种繁殖和分株繁殖，但种子结实少，且其分株慢，市场需求量大，种苗供应受限制。

中国专利CN103734019A公布了一种新西兰麻的组织培养方法，该方法包配制不同阶段的培养基来进行组织培养，可以提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状等优点。但是由于新西兰麻与多刺老鼠簕习性以及所需繁育环境差别较大，上述组织培养方法不能直接用于多刺老鼠簕的繁育过程。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种繁育速度快、成活率高的基于组织培养的多刺老鼠簕快速繁育方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种基于组织培养的多刺老鼠簕快速繁育方法，包括以下步骤：

(1)培养基的配制，包括组培各阶段培养基的组分和含量：

1.1、芽诱导培养基：MS+BA 1-3mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L；

1.2、不定芽增殖培养基：MS+6-BA 0.5-1.5mg/L+NAA 0.05-0.15mg/L；

1.3、壮苗培养基：MS+6-BA 0.1-1mg/L+NAA 0.05-0.15mg/L；

1.4、生根培养基：MS+NAA 0.1-0.3mg/L；

上述各种培养基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，琼脂6g/L，培养温度为25±1℃，光照为1700-1900Lx；

(2)多刺老鼠簕的组织培养：

2.1、无菌材料的获得

多刺老鼠簕在春季3-4月挖取地上部分的小芽，用自来水冲洗1h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于芽诱导培养基上；

2.2、芽的分化和增殖

小芽接种于诱导培养基上30天后，小芽基部开始膨大，出现黄绿色突起,再培养25天可见明显的愈伤组织，继续培养30天，切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基上培养；

2.3、不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3小芽可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；

2.4、生根培养

取1-2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至1-2cm；

2.5、炼苗与移栽

生根培养28-32天后，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化炼苗40天后，即移栽室外，给予肥水管理，移栽成活率为90％以上。

作为优选，所述的芽诱导培养基的组分和含量为：MS+BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L，该培养基下小芽长势最好。

作为优选，所述的不定芽增殖培养基的组分和含量为：MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L，该培养基下，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速，无玻璃化现象，在该培养中生长发育良好。

作为优选，所述的壮苗培养基的组分和含量为：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。

作为优选，所述的生根培养基的组分和含量为：MS+NAA 0.2mg/L，该培养基下，根系粗壮，须根众多，生根率为100％。

由于不同植株对于培养条件要求不同，尤其是对于培养基的要求差别很大，其中一个环节的培养基主要成分或含量的改变就有可能导致繁育成功率的大大降低。因此，本发明通过长久的实验过程，并根据多刺老鼠簕的特有植物生长属性与生长需求，研究了适合多刺老鼠簕快速繁育的多种培养基，在使用这些特殊研制的培养基基础上，结合本发明的培养条件，成功培育了多刺老鼠簕。

本发明通过组织培养技术，年繁殖系数提高到1:40000，成本减低0.6-0.8元/株，多刺老鼠簕组培苗极大提高繁殖速度和苗的整齐度,更好地保持原有的母本性状。