[发明专利]一种定量测量人血清中肌钙蛋白I（cTnI）的方法

权利要求书

1.一种定量检测人血清肌钙蛋白I(cTnI)的荧光分析方法，包括步骤：

(1)提供一种测试片，所述测试片包括：

(i)位于所述测试片一端的用于加入待测样品的加样区，以及位于所述测试片另一端的样品吸收区,其中样品吸收区具有吸收能力，从而使得加至加样区的样品从加样区扩散至末端样品吸收区；

(ii)与所述加样区相邻且位于流动方向下游的结合区，所述结合区包含：负载的、与人血清肌钙蛋白I结合的结合剂，所述结合剂包括被吸光物质标记的抗所述人血清肌钙蛋白I的单克隆抗体Ab1，所述结合剂能与人血清肌钙蛋白I结合形成含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物；

(iii)与所述结合区相邻且位于流动方向下游的测试区，所述测试区包含检测线，所述检测线上包含固定化的检测剂，所述检测剂包括抗所述人血清肌钙蛋白I的单克隆抗体Ab2，所述检测剂用于捕获从结合区移动至测试区的含有吸光物质的复合物，从而形成含有吸光物质的“Ab2-血清肌钙蛋白I-Ab1”三元复合物；

其中，在未测试前，所述的测试区在激发光照射下，在所述检测线的上游区域、所述检测线以及所述检测线下游区域发出均匀荧光；

(iv)位于测试区和样品吸收区之间的至少一个对照区，所述对照区含有固定化的对照剂，其中，所述对照剂用于特异性结合被吸光物质标记的结合剂；

(2)将含或不含人血清肌钙蛋白I的待测样品加至所述测试片的加样区；

(3)样品中的人血清肌钙蛋白I移动至结合区，与其中的被吸光物质标记的结合剂结合，从而形成可流动的含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物；

(4)步骤(3)中剩余的被吸光物质标记的结合剂或步骤(3)得到的可流动的含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物移动至测试区，与其中的检测剂结合，从而形成固定于测试区的含有吸光物质的“Ab2-血清肌钙蛋白I-Ab1”三元复合物；

(5)测定所述检测线的荧光强度F₂和所述测试区的基准荧光强度F₁，并基于所述F₂和F₁的比值，定量测定待测样品中人血清肌钙蛋白I的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的测试区的基准荧光强度F₁选自下组：

(i)在未测试前，所述的测试区的荧光强度；

(ii)在测试过程中，所述的测试区中除所述检测线之外的一个或多个基准区域的荧光强度；

(iii)由(i)和(ii)的组合。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的荧光强度F₂为平均荧光强度。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基准区域包括p个基准区，p为≥2的正整数。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基准区包括位于检测线下游的至少一个基准区域和位于检测线上游的至少一个基准区域；或者检测线下游的至少二个基准区域和任选的位于检测线上游的至少一个基准区域。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，包括步骤：

(5-1)选取m个基准区域的测试点，分别测量荧光值F₁₁-F_1m，计算F₁₁-F_1m的数学平均值所述中间处距离测试区远端的距离为d₁，距离对照区近端的距离为d₂，所述d₁：d₂＝1:2-2:1，其中m为≥2的正整数；

(5-2)选取n个测试区的测试点，分别测量荧光值F₂₁-F_2n，计算F₂₁-F_2n的数学平均值其中n为≥2的正整数；

(5-3)将测试区与对照区中间处的荧光强度平均值与测试区的荧光强度平均值的比值，和标准曲线进行比较，从而确定待测物的数量；或者

将测试区的荧光强度和标准曲线进行比较，从而确定待测物的数量。