[发明专利]一种定量测量人血清中肌钙蛋白I（cTnI）的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测检验技术领域，具体地涉及一种基于测量荧光强度的分析方法和装置。

背景技术

免疫检测领域中，胶体金免疫层析法(GICA)快速、简便、成本低廉、无需仪器，非专业人士也可操作，只需肉眼观察即可，使急诊、基层医院、病人床边和现场等远离大型实验室的地方开展相关检测成为可能，所以应用范围相当广泛。

完整的心脏组织中，心脏肌钙蛋白I(cTnI)的胞内水平变化可以用作心脏损伤存在的指示。以急性心肌梗塞AMI为例，其发病后1-6小时是介入手术治疗的黄金时间，快速诊断发病6小时内的早期AMI是治疗的关键环节，因此，心肌损伤生化标志物的检测显得尤为重要。其中，肌钙蛋白I(cTnI)是常用的心肌损伤标志物之一，cTnI不能透过细胞膜进入血循环，故健康人血内不含或含极低量的cTnI。由于cTnI对心肌细胞损伤有高度的敏感性和特异性，被人们认为是诊断AMI的“金标准”。而现有的胶体金免疫层析方法只用于定性或半定量检测(根据检测线灰度深浅定量)，灵敏度偏低，不能有效地在发病早期即做出有效判断，导致错过黄金抢救时间。

因此，本领域急需对现有的胶体金层析方法进行变革，在保持其诸如快捷、简便、成本低廉等原有的一切优势的前提下，又赋予其高灵敏度和定量准确的新优势，进一步深入而广泛地扩展其应用领域。

发明内容

本发明提供了一种用于定量检测样品中的人血清肌钙蛋白I的测试片、检测方法，以及定量检测人血清肌钙蛋白I的装置。

本发明第一方面，提供一种定量检测人血清肌钙蛋白I(cTnI)的荧光分析方法，包括步骤：

(1)提供一种测试片，所述测试片包括：

(i)位于所述测试片一端的用于加入待测样品的加样区，以及位于所述测试片另一端的样品吸收区,其中样品吸收区具有吸收能力，从而使得加至加样区的样品从加样区扩散至末端样品吸收区；

(ii)与所述加样区相邻且位于流动方向下游的结合区，所述结合区包含：负载的、与人血清肌钙蛋白I结合的结合剂，所述结合剂包括被吸光物质标记的抗所述人血清肌钙蛋白I的单克隆抗体Ab1，所述结合剂能与人血清肌钙蛋白I结合形成含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物；

(iii)与所述结合区相邻且位于流动方向下游的测试区，所述测试区包含检测线，所述检测线上包含固定化的检测剂，所述检测剂包括抗所述人血清肌钙蛋白I的单克隆抗体Ab2，所述检测剂用于捕获从结合区移动至测试区的含有吸光物质的复合物，从而形成含有吸光物质的“Ab2-血清肌钙蛋白I-Ab1”三元复合物；

其中，在未测试前，所述的测试区在激发光照射下，在所述检测线的上游区域、所述检测线以及所述检测线下游区域发出均匀荧光；

(iv)位于测试区和样品吸收区之间的至少一个对照区，所述对照区含有固定化的对照剂，其中，所述对照剂用于特异性结合被吸光物质标记的结合剂；

(2)将含或不含人血清肌钙蛋白I的待测样品加至所述测试片的加样区；

(3)样品中的人血清肌钙蛋白I移动至结合区，与其中的被吸光物质标记的结合剂结合，从而形成可流动的含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物；

(4)步骤(3)中剩余的被吸光物质标记的结合剂或步骤(3)得到的可流动的含有吸光物质的“血清肌钙蛋白I-Ab1”二元复合物移动至测试区，与其中的检测剂结合，从而形成固定于测试区的含有吸光物质的“Ab2-血清肌钙蛋白I-Ab1”三元复合物；

(5)测定所述检测线的荧光强度F₂和所述测试区的基准荧光强度F₁，并基于所述F₂和F₁的比值，定量测定待测样品中人血清肌钙蛋白I的浓度。

在另一优选例中，所述的测试区的基准荧光强度F₁选自下组：

(i)在未测试前，所述的测试区的荧光强度；

(ii)在测试过程中，所述的测试区中除所述检测线之外的一个或多个基准区域的荧光强度；

(iii)由(i)和(ii)的组合。

在另一优选例中，所述的荧光强度F₂为平均荧光强度。

在另一优选例中，所述的基准荧光强度F₁为平均荧光强度。

在另一优选例中，所述的基准区域包括p个基准区，p为≥2的正整数。