[发明专利]凝血酶溶液的稳定剂

说明书

技术领域

本发明涉及酶工业领域以及免疫检测领域，具体地说涉及凝血酶溶液的稳定剂、凝血酶溶液以及相关的检测试剂、制备稳定的凝血酶溶液的方法以及凝血酶溶液的稳定剂的用途。

背景技术

纤维蛋白原(Fibrinogen，FIB)是作为血凝块的主要蛋白质的纤维蛋白的前体物质，由肝实质细胞产生。生物体中的纤维蛋白原的约80％分布于血浆中(正常成年人中约为200～400mg/dL)，其余分布于组织中。纤维蛋白原是含有经二硫键结合的3对多肽(Aα，Bβ和γ)链的糖蛋白质，Aα，Bβ链通过凝血酶被分解而形成纤维蛋白，从而起到血栓生成、止血血栓的主要作用。在临床上，在炎症中增加，在高度的肝功能障碍、DIC等中减少。

纤维蛋白原测定的临床意义包括但不限于：1.病理性增高：(1)血栓前状态和血栓性疾病时，机体凝血功能增强，血浆纤维蛋白原增多，如急性心肌梗塞、糖尿病、妊娠高血压症、动脉粥样硬化、恶性肿瘤等。(2)蛋白合成增多，如结缔组织病、多发性骨髓瘤等。(3)反应性增多，如急性感染、急性肾炎、烧伤、休克、大手术后等。2.病理性降低：(1)消耗过多，导致血浆含量减少，如DIC等。(2)纤溶系统活性增强，FIB被分解，如原发性纤溶亢进症等。(3)合成减少，如重症肝炎、肝硬化等。

纤维蛋白原的测定法包括凝血酶添加法(Clauss法)、凝固时间法(PT演算法)、免疫比浊法(TIA)、乳胶法等，一般采用凝血酶添加法。

在凝血酶添加法下，纤维蛋白原的含量根据纤维蛋白原与凝血酶作用最终形成纤维蛋白的原理测定，以国际标准品为参比血浆制作标准曲线，用凝血酶来测定血浆凝固时间，即凝血酶时间(Thrombin Time，TT)，所得血浆凝固时间与血浆中纤维蛋白原浓度呈负相关，从而得到纤维蛋白原的含量。

具体而言，凝血酶时间是指在血浆中加入标准化的凝血酶原后血浆凝固的时间。在凝血酶作用下，待检血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白。当待检查的血浆中抗凝物质增多时，凝血酶时间延长。当待检查的血浆呈酸性、测试对象患有异常纤维蛋白血症等情况下，凝血酶时间缩短。

例如，凝血酶时间延长见于血浆纤维蛋白原减低或结构异常；临床应用肝素，或在肝病、肾病及系统性红斑狼疮时的肝素样抗凝物质增多；纤溶蛋白溶解系统功能亢进。

在纤维蛋白原测定时使用的凝血酶，从作为其前体的凝血酶原中切下肽而形成具有凝固活性的α-凝血酶。已知这种α-凝血酶会自分解成低分子量的不具有凝固活性的β-凝血酶，进而分解成γ-凝血酶，长期保存时，通常进行冷冻干燥。

对于测定纤维蛋白原(FIB)含量或凝血酶时间(TT)的试剂而言，现有的试剂均为冻干试剂，除了价格昂贵，在使用过程中，均需要复溶，使用不方便，而且必然会带来复溶过程中造成体积误差，导致结果出现偏差。而液体试剂不存在这一问题，并且使用方便，即开即用，批间差更小，结果更准确。因此迫切地需要开发出能够稳定凝血酶溶液的稳定剂以及稳定的凝血酶溶液制品。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对凝血酶溶液不便于保存的缺陷，改善凝血酶溶液的稳定性，从而延长保存时间，降低保存成本，方便使用，减少实验误差。

本发明的发明人意外地发现葡萄糖酸根离子与谷氨酸根离子具有稳定凝血酶溶液的协同效应。

本发明提供了用于凝血酶溶液的稳定剂，其包含水溶性葡萄糖酸化合物与水溶性谷氨酸化合物。在一种实施方案中，所述稳定剂由水溶性葡萄糖酸化合物与水溶性谷氨酸化合物组成。在另一种实施方案中，所述稳定剂包含水溶性葡萄糖酸化合物、水溶性谷氨酸化合物以及溶剂。在此外的另一种实施方案中，所述稳定剂包含水溶性葡萄糖酸化合物、水溶性谷氨酸化合物、溶剂以及本领域技术人员能够常规使用的辅助成分(例如缓冲剂、表面活性剂、防腐剂等)。所述溶剂可以是水、有机溶剂或者本领域技术人员能够常规确定或使用的溶剂中的一种或两种以上的组合。优选地，所述溶剂是水。

优选地，本发明的用于凝血酶溶液的稳定剂中，水溶性葡萄糖酸化合物与水溶性谷氨酸化合物的比例是1:50至50:1。优选地，所述比例的上限可以是40:1、30:1、20:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1，所述比例的下限可以是1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2，所述比例可以是上述上限值和下限值任意组合的范围。更优选地，所述比例可以是1:1。