[发明专利]一种富含γ‑亚麻酸的螺旋藻糖脂制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及保健食品技术领域，具体涉及一种富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂制备方法。

背景技术

螺旋藻(spirulina)是一类低等植物，在分类上属于蓝藻门，颤藻科^[1]，世界上己知螺旋藻共有36种，多为淡水种类，目前，大规模生产的螺旋藻品种有极大螺旋藻(Spirulina maximum)、钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)和盐泽螺旋藻(Spirulina subsalsa)。

螺旋藻富含多种营养物质，其中蛋白质含量丰富，氨基酸组成比例恰当，被认为是目前人类已知的蛋白质含量最高、质量最好的食品。而且螺旋藻中含有多种生物活性物质，其中糖脂含量丰富，包括单半乳糖二乙酰甘油酯(MGDG，mono-galactosyl-diaclyglycerol)，双半乳糖二乙酰甘油酯(DGDG，digalactosyl-diaclyglycerol)，硫代异鼠李糖二乙酰甘油酯(SQDG，sulfoqiuvonosyldiaclyglycerol)，具有降血脂、抗炎、抗肿瘤等活性，这三种油脂的分子结构如图1所示。螺旋藻富含的γ-亚麻酸主要存在于MGDG的Sn-1或Sn-2位，是糖脂主要的功能活性基团。

γ-亚麻酸(GLA，Gamma linolenic Acid)属于ω-6系列多不饱和脂肪酸^[2]，具有调节血压，降低胆固醇，预防糖尿病、癌症等功效^[3]。γ-亚麻酸主要分布于植物和微生物中，其中研究最为广泛的为月见草和琉璃苣，月见草油中含7～10％、琉璃苣油中含18～26％，由于近几年国内外市场需求增大，为寻求可替代资源，国内外研究者发现，已规模化培养的螺旋藻中富含大量的γ-亚麻酸，占细胞干重的1.1～1.5％左右，占总脂肪酸的18～21％^[4]，可见，螺旋藻是获取γ-亚麻酸潜在来源，具有很好地发展前景。

目前，对于富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂制备的专利及相关文献研究，提到的提取纯化方法主要集中在超临界二氧化碳萃取技术、尿素包合法等。但前者对设备要求高，且提取率并没有显著提高；后者有尿素、甲醇等残留，易形成可疑致癌物，不可直接应用于食品或保健品生产。因此，本发明选用绿色安全、在食品工业中批准使用的乙醇为提取溶剂，发明了一种安全易操作的提取方式，同时对乙醇粗提取物中富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂进行分离纯化，富集γ-亚麻酸。

发明内容

针对现有方法的上述缺点，本发明的目的在于提供一种绿色低毒溶剂提取、分离纯化富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂制备方法，用以提高γ-亚麻酸的提取效率和纯度。

为实现上述目的，本发明选用食品级乙醇作为提取溶剂，在温和的条件下进行螺旋藻粗脂提取，并采用食品工业中允许添加使用的食品加工助剂进行分离纯化，以获取富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂。该法包括从螺旋藻中提取粗脂成分，优化影响萃取效率的工艺参数，分离纯化富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂，分析其中的总脂肪酸及GLA含量。

具体地，本发明首先提供了一种富含γ-亚麻酸的螺旋藻糖脂制备方法，该方法包括以下步骤：

S1：乙醇浸提，将螺旋藻粉与乙醇按1:6～10(g/mL)的比例混合均匀，恒温搅拌提取，提取温度可在室温～60℃之间进行调节，提取时间为30～120min；

S2：螺旋藻粗脂获取，经乙醇提取后的粗提物，高速离心分离藻渣及上清液，上清液利用真空浓缩脱除有机溶剂，真空冷冻干燥后即得螺旋藻粗脂提取物；

S3：柱层析分离纯化，柱层析分离纯化步骤S2得到的螺旋藻粗脂提取物，上样量与柱层析硅胶量按1:30～200(g/g)上样，柱层析流动相为乙醇和正己烷混合溶剂。

具体地，所述柱层析分离纯化步骤为：

S3-1：装柱，将硅胶与适量洗脱液调成混悬液，采用湿法装柱；

S3-2：上样，螺旋藻粗脂提取物复溶于乙醇/正己烷混合溶剂，柱层析硅胶分离纯化螺旋藻粗脂提取物，干(湿)法上样均可，上样量与柱层析硅胶量按1:30～200(g/g)；上样量与柱层析硅胶量按更优选为1:200(g/g)；

S3-3：洗脱，装柱上样后采用乙醇/正己烷混合体系梯度洗脱，乙醇/正己烷比例为1:1～10(v/v)之间调节，洗脱0.5～3.0个柱体积，按体积收集洗脱液，50～100mL/瓶；

优选的，S1中提取温度为35-50℃，螺旋藻粉与乙醇的比例为1：6～8。更优选的，螺旋藻粉与乙醇的比例为1：7。