[发明专利]用于人EGFR基因突变检测的探针、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测人EGFR基因突变的非诊断目的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将捕获溶液加入到检测孔板中，电场处理3-10个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压800-1500mV，1-5s；所述捕获溶液含有以下成分：导电聚合物材料的体积百分数为0.1％～5％，盐离子化合物的浓度为0.01mol/L～2mol/L，捕获探针的浓度为0.5-1.5μmol/L；

电场处理完毕后采用清洗剂清洗，然后加入待测样本与杂交buffer的混合溶液，电场处理3-10个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压300-800mV，1-5s；

所述清洗剂包括含有质量浓度为0.04％-0.06％SDS的0.1×SSC-2×SSC混合液和含有体积百分数为0.05％-0.15％Tween20的PBS溶液；

检测孔板清洗，然后加入检测溶液，电场处理3-8个循环，每个循环电场处理的程序为：电压200-500mV，1-5s；电压300-800mV，1-5s；所述检测溶液是以PBS作为溶剂，其中封闭蛋白的重量百分数为0.1％～5％，检测探针的浓度为0.5-1.5μmol/L；所述检测探针上设置有标记物；

检测孔板清洗，然后加入酶液，孵育后清洗；所述酶液是以PBS作为溶剂，其中封闭蛋白的重量百分数为0.1％～5％，酶的体积百分数为0.05％～0.2％；所述酶上标记有与所述检测探针上设置的标记物结合的物质；

加入底物，在电压为-100～-300mV的电场处理下读数，得到电流值；

所述待测样本为体液，所述体液包括血浆、唾液、胸腔积液；

每个捕获探针和检测探针组成一个探针对；1-35探针对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-70所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物为地高辛、生物素、异硫氰酸荧光素标记物中的任一种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当检测探针上的标记物为地高辛或异硫氰酸荧光素时，酶上标记的物质相应的为地高辛抗体或异硫氰酸荧光素抗体；当检测探针上的标记物为生物素时，酶上标记的物质为亲和素。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述酶为辣根过氧化物酶聚合物或碱性磷酸酶；

当所述酶为辣根过氧化物酶聚合物时，底物为TMB与H₂O₂的混合物、邻苯二胺、ABTS、3-(4-羟基)中的任一种；

当所述酶为碱性磷酸酶时，底物为对硝基苯磷酸盐、BCIP和NBT的组合物、4-硝基苯磷酸二钠、萘酚AS-BI磷酸盐、萘酚-AS-MX-磷酸盐中的任一种。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述封闭蛋白为酪蛋白、胎牛血清、小牛血清中的任一种。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述导电聚合物材料为苯胺、噻吩和吡咯导电分子单体中的任一种；

所述盐离子化合物为氯化盐、硝酸盐、硫酸盐中的任一种。