[发明专利]一种用于病毒基因分型检测的探针组合、试剂盒以及方法

权利要求书

1.一种用于病毒基因分型检测的探针组合，其特征在于，其包括至少一个探针对，每个所述探针对包括用于结合目标序列的捕获探针和与所述捕获探针相对应的且可结合所述目标序列的检测探针，每个所述探针对的检测探针的3’端或5’端标记有用于结合催化酶的亲和物，所述催化酶用于催化底物产生化学反应形成电子流；

其中，所述捕获探针用于在电场作用下被固定在检测孔板上的反应孔的孔底以将所述目标序列固定；

所述探针组合包括：第1探针对、第2探针对、选自第3～11探针对中的至少一种、以及选自第12～16探针对中的至少一种；

其中，所述第1探针对的捕获探针的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述第2探针对的捕获探针的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述第3～11探针对的捕获探针的碱基序列分别如SEQ ID NO.5～13所示，所述第12～16探针对的捕获探针的碱基序列分别如SEQ ID NO.20～24所示；

所述第1探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，所述第2探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，所述第3探针对和所述第5探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.14所示，所述第4探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.15所示，所述第6探针对和所述第11探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.16所示，所述第7探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.17所示，所述第8探针对和所述第9探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.18所示，所述第10探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.19所示，所述第12探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.26所示，所述第13探针对和所述第14探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.25所示，所述第15探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.27所示，所述第16探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.28所示。

2.一种用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的用于病毒基因分型检测的探针组合。

3.根据权利要求2所述的用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于将所述探针对的捕获探针固定至检测孔板的固定物，所述固定物包括导电聚合物和离子化合物；

所述导电聚合物为选自吡咯、苯胺和噻吩中的任一种；

所述离子化合物为选自氯化钠和氯化钾中的任一种。

4.根据权利要求2所述的用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述检测孔板，所述检测孔板的反应孔内固定有所述探针对的捕获探针。

5.根据权利要求2所述的用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述催化酶，所述催化酶是带有标记物的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，所述标记物用于与所述亲和物结合，所述标记物为地高辛抗体、异硫氰酸荧光素抗体和链霉亲和素中的任一种；

所述探针对的检测探针的3’端或5’端标记的所述亲和物是与所述标记物相对应的地高辛、异硫氰酸荧光素和生物素中一种。

6.根据权利要求5所述的用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述催化酶的所述底物；

当所述催化酶为所述辣根过氧化物酶时，所述底物是TMB、ABTS和OPD中的任一种；

当所述催化酶为所述碱性磷酸酶时，所述底物是BCIP和NBT的组合物、对硝基苯磷酸盐、4-硝基苯磷酸二钠、萘酚AS-BI磷酸盐、萘酚-AS-MX-磷酸盐中的任一种。

7.根据权利要求2所述的用于病毒基因分型检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括清洗液，所述清洗液包括洗液A和洗液B，所述洗液A是含SDS的SSC缓冲液，所述洗液B是含Tween20的PBS缓冲液。

8.一种用于病毒基因分型检测的方法，所述方法的检测目的是以非疾病的诊断为目的，其特征在于，其包括如下步骤：

先将用于结合目标序列的捕获探针通过电场作用固定至检测孔板的反应孔内；

将待测样本加入至所述反应孔内；

加入与所述捕获探针对应的且可结合所述目标序列的检测探针至所述反应孔内，所述检测探针的3’端或5’端标记有可用于结合用于催化相应底物产生化学反应形成电子流的催化酶的亲和物；

加入所述催化酶和所述底物至所述反应孔内，通过电流检测装置检测所述反应孔内的电流；

所述探针组合包括：第1探针对、第2探针对、选自第3～11探针对中的至少一种、以及选自第12～16探针对中的至少一种；

其中，所述第1探针对的捕获探针的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述第2探针对的捕获探针的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述第3～11探针对的捕获探针的碱基序列分别如SEQ ID NO.5～13所示，所述第12～16探针对的捕获探针的碱基序列分别如SEQ ID NO.20～24所示；

所述第1探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，所述第2探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，所述第3探针对和所述第5探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.14所示，所述第4探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.15所示，所述第6探针对和所述第11探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.16所示，所述第7探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.17所示，所述第8探针对和所述第9探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.18所示，所述第10探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.19所示，所述第12探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.26所示，所述第13探针对和所述第14探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.25所示，所述第15探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.27所示，所述第16探针对的检测探针的碱基序列如SEQ ID NO.28所示。