[发明专利]一种用于病毒基因分型检测的探针组合、试剂盒以及方法

说明书

本发明公开了一种用于病毒基因分型检测的探针组合，涉及基因检测技术领域，其包括至少一个探针对，每个探针对包括用于结合目标序列的捕获探针和与捕获探针对应的且可结合目标序列的检测探针，检测探针的3’端或5’端标记有用于结合催化酶的亲和物。该探针组合能够对待测样本中的病毒进行基因型检测，具有较强的特异性、较高的灵敏度以及较低的假阳性率，且检出结果准确可靠。此外，本发明还公开了包括有上述探针组合的用于病毒基因分型检测的试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体而言，涉及一种用于病毒基因分型检测的探针组合、试剂盒以及方法。

背景技术

宫颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一，已有研究表明，高危型人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)持续感染及多重感染是导致宫颈癌变的重要原因之一，全球范围的研究结果显示，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在。目前已经发现的HPV有200多种型别，主要包括低危型和高危型两大类。不同型别与不同疾病的相关性也不一样，低危型HPV感染可能会引起生殖道湿疣病变，高危型HPV感染则与宫颈癌、阴道癌相关。目前还缺乏针对HPV公认的有效治疗手段，因此宫颈HPV早发现、早预防是阻断癌变的关键。

多年来，国际上通用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊断主要遵循“三阶梯式”诊断程序，即宫颈细胞学、阴道镜及组织病理学检查。由于HPV不能体外培养，HPV检测方法主要基于HPV DNA的分子分型。HPV核酸检测技术主要包括杂交捕获法，PCR-荧光探针法、转录介导的核酸扩增技术以及PCR-杂交法等。

宫颈癌的早期筛查方式是采用巴氏涂片以及改进后的TCT技术，这些方法只能从细胞学病变的角度来评估宫颈癌的发病情况，也就是说需要等到遭受病毒感染的细胞开始出现明显变化时才可以检测出来，特异性和灵敏度均不够理想。随着对HPV感染导致宫颈癌的认识加深以及分子诊断技术的发展，HPV基因检测作为宫颈癌的一种筛查手段得到了更广泛的应用。目前HPV分型检测技术主要基于聚合酶链反应，如荧光定量、反向斑点杂交和基因芯片技术等，这些技术表现出高灵敏度、高特异性，可以进行多重感染检测等优点，但这些技术对实验条件和检验人员素质要求高，检测费用也较高，不太适用于大量的临床检测和大规模的流行病学筛查。第二代基因杂交捕获技术检测采用美国Digene公司的HC2技术试剂盒，HC2是一种应用微孔板化学发光进行信号放大的核酸杂交检测方法，被公认为评价HPV检测新技术的金标准。然而，HC2检测方法价格昂贵，且其方法操作繁琐，操作过程中容易交叉污染而出现假阳性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于病毒基因分型检测的探针组合，该探针组合能够对待测样本中的病毒进行基因型检测，具有较强的特异性、较高的灵敏度以及较低的假阳性率，且检出结果准确可靠。

本发明的第二目的在于提供一种用于病毒基因分型检测的试剂盒，该试剂盒能够对待测样本中的病毒进行基因型检测，其具有较强的特异性和较高的灵敏度，且检出结果准确可靠、假阳性率低、操作简单方便。

本发明的第三目的在于提供一种病毒基因分型检测的方法,该方法能够对待测样本中的病毒进行基因型检测，具有较强的特异性和较高的灵敏度，且检出结果准确可靠，检测方法简单易操作。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一种用于病毒基因分型检测的探针组合，其包括至少一个探针对，每个探针对包括用于结合目标序列的捕获探针(Capture Probe，CP)和与捕获探针相对应的且可结合目标序列的检测探针(Detector Probe，DP)，每个探针对的检测探针的3’端或5’端标记有用于结合催化酶的亲和物，催化酶用于催化底物产生化学反应形成电子流。

一种用于病毒基因分型检测的试剂盒，其包括上述的用于病毒基因分型检测的探针组合。

一种用于病毒基因分型检测的方法，其包括如下步骤：