[发明专利]一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板在审
申请号: | 201610882475.7 | 申请日: | 2016-10-08 |
公开(公告)号: | CN107130300A | 公开(公告)日: | 2017-09-05 |
发明(设计)人: | 李笑宇 | 申请(专利权)人: | 深圳劲宇生物科技有限公司 |
主分类号: | C40B50/06 | 分类号: | C40B50/06;C40B70/00 |
代理公司: | 北京天奇智新知识产权代理有限公司11340 | 代理人: | 蔡飞燕 |
地址: | 518000 广东省深圳市坪山新区坪*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 dna 编码 分子 合成 方法 模板 | ||
1.一种DNA编码分子库的合成方法,其包含以下步骤:
(1)DNA编码:通过N个DNA标签r对N个结构基团R进行编码,得N个结构单元RD;DNA标签r通过光切断连接基团与结构基团R连接;
(2)构建DNA模板,其包含依次连接的发卡形的PCR结合区PBS-1、与N个结构单元对应结合的N个反应区t及PCR引物结合区PBS-2;在反应区中,具有非经典的inosine碱基;
(3)DNA偶合:结构单元RD1的DNA标签r1结合在DNA模板的反应区t1上;
(4)酶连:加入连接酶将DNA标签r1与DNA模板起始端相连接;
(5)化学反应:结构单元RD1的结构基团R1与DNA模板末端进行化学反应,即R1与DNA模板末端相连接;
(6)光照:通过光照切断结构基团R1与DNA标签r1之间的连接,恢复DNA模板的线形结构,实现对结构基团R1化学反应的编码;
(7)对剩余的结构单元依次重复步骤(3)至(6),重复N-1次,实现对N个结构基团R之间化学反应的编码;即完成DNA编码分子库的合成;其中,N≥2。
2.根据权利要求1所述的DNA编码分子库的合成方法,其特征在于,所述光照为紫外光照。
3.根据权利要求1所述的DNA编码分子库的合成方法,其特征在于,N=3。
4.根据权利要求1或3所述的DNA编码分子库的合成方法,其特征在于,所述步骤(4)、(5)和(6)之间的顺序可任意排列。
5.根据权利要求4所述的DNA编码分子库的合成方法,其特征在于,
(1)DNA编码:通过3个DNA标签r对3个结构基团R进行编码,得3个结构单元RD;DNA标签r通过光切断连接基团与结构基团R连接;
(2)构建DNA模板,其包含依次连接的发卡形的PCR结合区PBS-1、与3个结构单元对应结合的3个反应区t及PCR引物结合区PBS-2;在反应区中,具有非经典的inosine碱基;
(3)DNA偶合:结构单元RD1的DNA标签r1结合在反应区t1上;
(4)酶连:加入连接酶将DNA标签r1与PCR结合区PBS-1相连接;
(5)化学反应:结构单元RD1的结构基团R1与PCR引物结合区PBS-2进行化学反应,即R1与PBS-2相连接;
(6)光照:通过光照切断结构基团R1与DNA标签r1之间的连接,恢复DNA模板的线形结构,实现对结构基团R1化学反应的编码;
(7)DNA偶合:结构单元RD2的DNA标签r2结合在反应区t2上;
(8)酶连:加入连接酶将DNA标签r2与DNA标签r1相连接;
(9)化学反应:结构单元RD2的结构基团R2与结构基团R1进行化学反应,即R2与R1相连接;
(10)光照:通过光照切断结构基团R2与DNA标签r2之间的连接,恢复DNA模板的线形结构,实现对结构基团R1、R2之间化学反应的编码;
(11)DNA偶合:结构单元RD3的DNA标签r3结合在反应区t3上;
(12)酶连:加入连接酶将DNA标签r3与DNA标签r2相连接;
(13)化学反应:结构单元RD3的结构基团R3与结构基团R2进行化学反应;
(14)光照:通过光照切断结构基团R3与DNA标签r3之间的连接,恢复DNA模板的线形结构,实现对结构基团R1、R2和R3之间化学反应的编码;即完成DNA编码分子库的合成。
6.一种DNA编码分子库合成用的DNA模板,其特征在于,所述DNA模板包含依次连接的发卡形的PCR结合区PBS-1、与N个结构单元对应结合的N个反应区t及PCR引物结合区PBS-2;在反应区中,具有非经典的inosine碱基。
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