[发明专利]一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板在审

申请号：	201610882475.7	申请日：	2016-10-08
公开（公告）号：	CN107130300A	公开（公告）日：	2017-09-05
发明（设计）人：	李笑宇	申请（专利权）人：	深圳劲宇生物科技有限公司
主分类号：	C40B50/06	分类号：	C40B50/06;C40B70/00
代理公司：	北京天奇智新知识产权代理有限公司11340	代理人：	蔡飞燕
地址：	518000 广东省深圳市坪山新区坪***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种 dna 编码分子合成方法模板
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【说明书】：

技术领域

本发明涉及了DNA编码技术领域，特别是涉及了一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板。

背景技术

当代药物研发中，针对疾病的药物靶点，通过构建大型的候选药物分子库，进行高通量、大规模筛选是新药研发中不可或缺的手段。当今世界上主要的制药公司均拥有大型的分子库和大规模的筛选平台用于新药研发。然而，传统的分子库和筛选平台成本高昂、技术门槛高、管理运行复杂，成为高通量筛选发展和应用中的严重制约。近5年来，DNA编码分子库技术逐渐发展起来，成为药物研发中的新兴筛选方法。在DNA编码分子库中，每一个化合物与一个特异性的DNA链相连接，成为一个特异的条形码，实现对化合物的特异性编码。DNA编码分子库能够在极小的体系中，实现千万乃至上亿级的高通量筛选。筛选结果可以通过PCR扩增和DNA测序进行解码分析，已获得先导化合物用于进一步药物研发。近年来，DNA编码分子库已经得到新药研发领域中的广泛认可和应用，成为新药研发中的一种重要支撑技术。

在DNA编码分子库中，一个关键的技术环节即为如何对存在于同一个溶液体系中的多种化合物进行特异性的编码；即如何有效、准确地在每一个不同化合物上连接不同的DNA条形码。本领域的发展中，出现了多种编码的方法；包括组合化学中传统的“split-pool-split”方法、DNA 模板控制合成、DNA routing、DNA双链连接等多种方法。本专利描述了一种新型的模板控制分子库合成方法，能够仅以一个DNA模板，合成整个DNA编码分子库。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种DNA编码分子库的合成方法及DNA模板。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种DNA编码分子库的合成方法，其包含以下步骤：

(1)DNA编码：通过N个DNA标签r对N个结构基团R进行编码，得N个结构单元RD；DNA标签r通过光切断连接基团与结构基团R连接；

(2)构建DNA模板，其包含依次连接的发卡形的PCR结合区PBS-1、与N个结构单元对应结合的N个反应区t及PCR引物结合区PBS-2；在反应区中，具有非经典的inosine碱基；

(3)DNA偶合：结构单元RD1的DNA标签r1结合在DNA模板的反应区t1上；

(4)酶连：加入连接酶将DNA标签r1与DNA模板起始端相连接；

(5)化学反应：结构单元RD1的结构基团R1与DNA模板末端进行化学反应，即R1与DNA模板末端相连接；

(6)光照：通过光照切断结构基团R1与DNA标签r1之间的连接，恢复DNA模板的线形结构，实现对结构基团R1化学反应的编码；

(7)对剩余的结构单元依次重复步骤(3)至(6)，重复N-1次，实现对N个结构基团R之间化学反应的编码；即完成DNA编码分子库的合成；其中，N≥2。

其中，所述光照为紫外光照；所述步骤(4)、(5)和(6)之间的顺序可任意排列。