[发明专利]一种高效快速检验肉苁蓉种子发芽率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业经济作物育种技术领域，具体涉及一种高效快速检验肉苁蓉种子发芽率的方法。

背景技术

肉苁蓉作为中草药在中国已有1800年的应用历史，是我国稀有的名贵中药材，有“沙漠人参”之美誉，是补肾壮阳的要药。目前生药市场上普遍使用的肉苁蓉生药有三种，分别为荒漠肉苁蓉、管花肉苁蓉和盐生肉苁蓉。肉苁蓉是一种多年生的专一性根寄生植物，成熟肉苁蓉种子的胚为球形原胚，发育简单，无胚根、胚芽和子叶的分化，在自然条件下萌发需经历一定时间的形态后熟与生理后熟期后，才能解除休眠。由于肉苁蓉种子存在复杂的休眠特性和特殊的根专性寄生生物学特性，导致自然萌发困难、发芽率极低。目前，野生肉苁蓉资源匮乏，特别是药用效果最好的荒漠肉苁蓉，野生荒漠肉苁蓉和寄主梭梭均处于濒危境地，现为国家二级保护植物，被列入《中国植物红皮书》。因此，人工栽培肉苁蓉已经成为我国西北地区发展经济作物，改善农业种植结构的重要途径，将为当地农户带来可观的经济效益。

虽然荒漠肉苁蓉人工栽培面积在逐年扩大，但荒漠肉苁蓉种子价格昂贵，一公斤种子价格高达3万元左右，但由于荒漠肉苁蓉种子萌发困难，市售的荒漠肉苁蓉种子掺假现象严重。但是目前还没有快速检验肉苁蓉种子发芽率的方法，常规发芽实验的方法并不适用于肉苁蓉种子，因为常规发芽方法处理下，肉苁蓉种子发芽率较低，发芽时间过长，不能快速准确地得出肉苁蓉种子的质量数据，没有数据支持的肉苁蓉种子给农户带来巨大的生产隐患。

近些年，国内外的科研工作者针对打破肉苁蓉种子休眠开展了一些研究，采用的方法多种多样，比如：欧阳杰等采用50℃高温预处理肉苁蓉种子，诱导种子形成愈伤组织；牛东玲等通过温水处理、变温以及外源GA₃预处理，可以使肉苁蓉种子萌发率达到16.7％；盛晋华等对肉苁蓉种子经过2～5℃低温层积处理,发现种子内源激素GA₃含量逐渐增加，ABA含量逐渐降低，最高发芽率17.8％；盛晋华研究发现氟啶酮能够打破荒漠肉苁蓉种子休眠，采用该法荒漠肉苁蓉发芽率最高可达52.5％，发芽延续时间约30天左右。虽然这些方法在一定程度上打破了肉苁蓉种子的休眠，但是发芽率依然偏低且不稳定，而且发芽时间偏长，就算在最理想状态下，管花肉苁蓉发芽率最高能达75％，荒漠肉苁蓉发芽率最低，为16.7％-52.5％，直到30d才能统计发芽率。现有的方法不便于种子质量检验，严重影响肉苁蓉种子市场流通，增加农户种植的风险。

发明内容

为解决上述问题，本发明提出一种高效快速检验肉苁蓉种子发芽率的方法，旨在为提出一种能够显著提高肉苁蓉种子发芽率、缩短发芽时间、为肉苁蓉种子质量检验和栽培提供技术支撑的检验方法。

本发明提供的高效快速检验肉苁蓉种子发芽率的方法，包括如下步骤：

1)温水浸种：将肉苁蓉种子首先在25-40℃温水中浸泡3-5h；

2)氟啶酮处理：将步骤1)所得肉苁蓉种子在20-30℃条件下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡24-48h，然后蒸馏水冲洗干净备用；

3)配制培养基：配制1/2MS专用培养基或大量元素专用培养基，将配制好的培养基分装至已灭菌的培养皿中备用；

4)种子消毒：在超净工作台上将步骤2)冲洗干净的种子用消毒剂进行消毒，并用无菌蒸馏水冲洗干净；

5)种子置床：采用无菌操作技术将步骤4)消毒好的种子置于步骤3)已制备好的培养皿上，每个培养皿置30-80粒种子；

6)发芽：将步骤5)种子已置床的培养皿置于25℃进行发芽。

进一步，所述1/2MS专用培养基的配制方法为，采用MS培养基配方为基础，将其中所有无机盐的浓度都减半，配制出1/2MS基础培养基，然后加入占1/2MS基础培养基重量3％的蔗糖，调整pH值为5.8，再加入占1/2MS基础培养基重量0.8％的琼脂，搅拌均匀后高压湿热灭菌，获得1/2MS专用培养基。

进一步，所述大量元素专用培养基包含的组分为KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄，其浓度分别为950mg/L、825mg/L、185mg/L、85mg/L，将上述四种组分按相应浓度混合，调整pH值为5.8，加入占培养基重量0.8％的琼脂，搅拌均匀后高压湿热灭菌，获得大量元素专用培养基。

优选地，所述温水浸种步骤中，将肉苁蓉种子在30℃温水中浸泡4h。