[发明专利]一种白穗柯初代培养芽诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及白穗柯无性繁殖技术，尤其是一种白穗柯初代培养芽诱导方法。

背景技术

白穗柯（Lithocarpus craibianus Barn. ），系壳斗科（Fagaceae）柯属（Lithocarpus）乔木，乔木，高达20米。当年生枝、叶背及雌花序轴均有棕黄色或灰白色蜡鳞层。叶革质，卵形或卵状椭圆形，长12-19厘米，有时较短或更长，宽4-7厘米，稀更宽，顶部长尖，基部短尖至宽楔形，全缘，中脉的下段在叶面厚，叶脉约有8-12条，在叶面常呈裂槽状凹陷，支脉不显或隐约可见，嫩叶干后叶面常有油润光泽，二年生叶则苍暗；叶柄长1-2.5厘米。雄穗状花序腋生，稀为圆锥花序，长达15厘米；雌花序的上部常着生少数雄花，长达30厘米，雌花3-5-7朵集生成簇，花柱长1-1.2毫米。壳斗圆球形或略扁，顶端常呈乳头状短凸起，径15-20毫米，全包坚果，偶有顶部边缘开裂并反卷，故坚果部分外露，小苞片三角形，钻尖状，伏贴于壳壁，覆瓦状排列，分明，位于壳斗顶部的略狭长且向壳斗口部下弯，被黄棕色、细片状、稍紧贴的蜡鳞；坚果近圆球形，径13-18毫米，被甚稀疏的细伏毛，顶部的毛较密，果脐凸起，占坚果面积的1/3。花期8-9月，果次年同期成熟。产四川西南部、云南南部及西南部各地。生于1 500-2 700米山地杂木林中，多见于较干燥坡地，常因被砍伐，故生成灌木状，通常为10 米上下的小乔木。老挝、泰国北部也有。

目前，白穗柯资源仍处于野生分布状态，但随着保持植物多样性的需求，规模化人工栽培白穗柯资源势在必行。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术，选择白穗柯优良家系或者无性系为材料，通过组织培养方法繁殖苗木，既可以满足生产上的数量要求，又可保持母本性状。组织培养过程中，初代培养是制约组织培养顺利进行的关键步骤，其中涉及了外植体的获取、外植体的消毒、培养基选择以及培养过程中培养体褐变、苗木玻璃化等重要问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能克服芽诱导过程中外植体褐变以及玻璃化等问题，提高芽诱导率，出芽指数以及萌芽生长状况，获取数量多、质量好的萌芽，从而满足增殖培养的需要，促进白穗柯组织培养快速繁殖体系的建立的白穗柯初代培养芽诱导方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种白穗柯初代培养芽诱导方法，采用白穗柯基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其操作步骤为，

（1）外植体选择：选择白穗柯基部萌发的半木质化的萌条为外植体；

（2）外植体消毒及接种：将白穗柯萌条经过洗洁精清洗，流水冲洗和化学试剂处理消毒后，剪切成茎段接入芽诱导培养基中；

（3）芽诱导培养：将接种后的外植体置于适宜室内条件下培养。

以上所述的芽诱导培养基其原料含量为：1/3～1/2改良WPM培养基+6-BA 1.0～2.0mg/L+维生素C10mg/L+乳糖5.0g/L+蔗糖20.0g/L。

以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH₄NO₃ 810 mg/L，CaCl₂·2H₂O 192 mg/L，MgSO₄·7H₂0 300 mg/L，KH₂PO₄ 250 mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O 180 mg/L，KI 0.83 mg/L，H₃BO₃ 6.2 mg/L，MnSO₄·H₂O 22.4 mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.25 mg/L，Na₂·EDTA 37.3 mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L，肌醇85 mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。