[发明专利]一种制备骨诱导成骨制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种修复骨损伤的制剂，特别的，尤其涉及一种一种诱导骨生成，促进骨组织形成或者修复骨损伤的制剂以及方法。

背景技术

骨诱导成骨技术是目前外科整复和牙周重建常用的一种技术，主要利用骨诱导因子激活骨增长和生产功能产生新骨。骨诱导因子较多，现研究主要集中于骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein。BMP)家族蛋白研究，骨形态发生蛋白属低分子糖蛋白类，现已发现了骨形态发生蛋白l-14多种蛋白成分，其中骨形态发生蛋白2的骨诱导活性最强，其它骨形态发生蛋白成分对骨形态发生蛋白2有协同作用，共同参与诱导成骨过程。有学者认为骨形态发生蛋白是转化生长因子13(TGF一13)超家族的一种，它具有明显的骨再生和骨整合能力，能够诱导软骨和骨形成，并且能够诱导血管周围的间充质细胞转化为骨干细胞，它与细胞外基质大分子相互作用形成的骨形态发生蛋白是调节骨形成作用的基础。骨形态发生蛋白广泛存在于哺乳动物的骨基质和牙基质中，是一种无种属特异性的，属局部生长因子的酸性糖蛋白，但骨中骨形态发生蛋白随年龄的增大而逐渐减少，而牙基质中的骨形态发生蛋白未见减少。还有研究显示脱钙牙基质(demineralized dental matrix，DDM)中骨形态发生蛋白的粗提物是同质量脱钙骨基质(demineralized bone matrix，DBM)中的10倍，相应地脱钙牙基质在肌肉中诱导成骨量应为同质量脱钙骨基质的10倍。但是，单纯的骨形态发生蛋白在体内扩散太快，也易被蛋白酶分解，因而不能在有效的时间内作用于更多的靶细胞，其诱导活性难以得到充分的发挥；骨形态发生蛋白的纯化制取比较困难，成本较高，难以在临床广泛推广使用；有研究发现纯化高的骨形态发生蛋白并不能取得较高的生物诱导活性，只有与相应骨基质联合使用，才能有效诱导成骨，这是因为胶原和基质可能影响了羟基磷灰石晶体中的钙和磷酸盐根离子，有机物也可能扮演了一个结晶化的中心。关于骨形态发生蛋白的载体研究虽有许多报道，如采用羟基磷灰石、磷酸盐三钙、聚酯、胶原、脱矿骨基质、氧化钛、血块等载体，但是骨形态发生蛋白与载体间的结合方式、复合方法、复合比例，仍未有统一的结论。因此，当前研究的方向转为复合性骨诱导材料的研制。

研究认为脱钙牙基质(demineralized dentin matrix，DDM)是一种富含骨形态发生蛋白、胶原及其它蛋白多糖的复合物，是一种新型的具有骨诱导作用的人类同源性的生物活性材料，它富含多种骨诱导蛋白及其载体的复合物，形成了一种骨形态发生蛋白的天然缓慢释放系统。例如中国发明专利95112416.1；或者中国发明专利申请，申请号201310602830.7；申请号201310602878.8中介绍了通过处理牙齿获得这些可以促进骨头伤口愈合或者再生的材料。另外，也在牙基质中添加一些成分，进而改进牙基质的效果，例如中国发明专利申请，申请号201510089391.3和申请号201110129457.9中的描述。

当然，还有采用体外表达BMP蛋白然后和骨骼粉末或者其他粉末混合，这种方法制备的修复材料，实际效果并不理想，主要是BMP蛋白在体外容易失去活性，和这些粉末混合后，被施加到损伤的骨骼中，容易被酶降解也失去活性。因此只有在体内保持BMP的活性，才能更好的达到促进骨组织的生长。

以上描述的方法，虽然对骨头损伤的修复具有一定的效果，但是仍然存在很多固有的缺陷，主要体现在以下几点：(1)牙齿作为活性BMP的来源有限，不能满足日益增长的市场需要，毕竟光靠牙基质作为原料，限制了行业的发展；(2)对牙齿、骨骼进行粉碎处理后，通常在酸性溶液进行脱钙，获得含有活性蛋白BMP的粉末，但酸碱等处理虽然可以释放钙离子，暴露BMP蛋白，同时也对BMP的蛋白具有极大的损伤，因为BMP容易在酸性条件下变性而失去活性；这样就降低了BMP蛋白的利用效率。

因此，有必要对现行方法进行改进，或者采用新的方法获得骨修复材料。

发明内容

一方面，本发明提供一种制备骨诱导成骨制剂的方法，该方法包括如下步骤：1.对牙基质进行脱钙处理；2.然后再向经过脱钙处理的牙基质中添加外源活性蛋白BMP，即骨形态发生蛋白，从而形成诱导成骨制剂。

另一方面，本发明提供一种制备骨诱导成骨制剂的方法，该方法包括如下步骤：1.对2份牙基质进行脱钙处理；2.然后再对经过脱钙处理的2份牙基质进行去除骨形态发生蛋白处理；3.最后让提取的骨形态发生蛋白与其中的1份脱钙处理的牙基质进行混合，从而形成诱导成骨制剂。