[发明专利]独蒜兰组织培养一步成苗培养方法

说明书

本发明公开了一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法。本发明充分利用独蒜兰蒴果种子数量大的优势，以种子为外植体建立适合独蒜兰一步成苗的组培快繁技术，本发明通过MSN培养基大大缩短了组培时间，并且可以有效解决组培苗黄化、生根困难、茎叶徒长的问题，大大降低了生产成本，提高了繁殖的成活率，是值得推广的技术。

技术领域

本发明涉及农业科技领域，尤其是一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法。

背景技术

独蒜兰(Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe)，又名冰球子，为兰科独蒜兰属多年生植物，为中国药典上收录的山慈菇的基原植物，以假鳞茎入药，具有清热解毒、消肿散结功能。近年来，因其具有抗癌作用而受到日益关注。随着独蒜兰药用价值的开发，价格不断上涨，野生资源濒临绝灭。如今，独蒜兰栽培技术已经成熟，但是种苗问题没有解决，独蒜兰种子十分细小，自然条件下很难萌发，生产上主要还是利用分株法繁殖，繁殖系数很低，根本不能满足市场的需求和资源的可持续利用。组培技术的发展为独蒜兰种苗生产提供了新的途径，如何降低成本、提高种苗质量成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是：提供一种独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，它可以使独蒜兰种子萌发后一步成苗，只需转接一次，即可出瓶移栽，且所生产的组培苗球茎大、根系发达。

本发明是这样实现的：独蒜兰组织培养一步成苗培养方法，包括如下步骤：

1)优良种子的获得：选择芽眼饱满、个头大、无病害的独蒜兰假鳞茎，于当年11月-翌年2月栽种，3月～4月开花后进行独蒜兰人工授粉；

2)蒴果的采收与选择：授粉后190-210天，挑选饱满的黄色蒴果，适时采收；

3)无菌播种：蒴果采收后，先用水冲洗干净硕果表面，然后用酒精擦拭蒴果表面消毒处理，在无菌条件下，将种子均匀地播种到播种培养基表面，播种瓶放在培养室中培养3周后种子开始萌发成绿色原球茎，2个月后长成带叶的幼苗；

4)幼苗转接：将带叶幼苗转接到MSN培养基上，每瓶转接15株；转接后的幼苗及时放在培养室中培养，生长3-4个月后形成球茎直径0.7-0.9cm的幼苗，即可出瓶移栽。

步骤3)中所述的播种培养基是以B5培养基为基础，包含0.5mg/L NAA、20g/L蔗糖、6.5g/L琼脂及0.5g/L活性炭，pH值为5.8，培养基分装后在121℃灭菌25分钟备用。

步骤3)中所述的用酒精擦拭蒴果表面消毒处理是指，用浸泡过质量百分比为75％酒精的脱脂棉对独蒜兰蒴果表面擦拭2-3次，然后将蒴果放置在消过毒的培养皿中，再在杀过菌的超净工作台上再用酒精浸泡的棉球擦蒴果表皮，用消毒过的镊子夹住蒴果在酒精灯外焰处来回快速烧2-3秒，如此反复烧2次，即完成对独蒜兰蒴果的消毒。

所述的步骤3)中，播种好的培养瓶在培养室培养的条件是：温度为22±1℃，光照时间12h/d，光照强度1800-2000lx。

步骤4)中所述的MSN培养基包括硝酸钾KNO₃：850-1050mg/L，硝酸铵NH₄NO₃：300-450mg/L；磷酸二氢钾KH₂PO₄：112-212mg/L；硫酸镁MgSO₄.7H₂O：150-230mg/L；氯化钙CaCl₂：180-260mg/L；微量元素、有机物和铁盐的组成成分和MS相同，但是浓度减半；NAA的浓度为1.0-1.2mg/L；蔗糖的浓度为20-30g/L；琼脂的浓度为6-7g/L；活性炭的浓度为0.5-1.5g/L；土豆汁的浓度为50-150g/L。

所述步骤4)中，幼苗转接后的培养条件为温度为22±1℃，光照时间14h/d，光照强度2000-2200lx。