[发明专利]一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法

权利要求书

1.一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)在酶标板上包被抗体；

2)以氯仿为溶剂，配制油酸基团修饰的量子点浓度为15～25mg/mL、PMMA浓度为25～35mg/mL、PMAO浓度为15～25mg/mL的混合溶液，保持25～35min，而后将取十二烷基磺酸钠水溶液与所述混合溶液混合至其中油酸基团修饰的量子点浓度为3～4mg/mL，混合均匀后去除氯仿，固液分离取固相，即得到标记有羧基修饰的量子点的荧光微球；

3)利用牛血清白蛋白包被标记有羧基修饰的量子点的荧光微球，将包被产物与赭曲霉毒素A偶联，即得到竞争抗原；

4)将待测溶液与所述竞争抗原加入至步骤1)包被有抗体的酶标板中，抗原抗体结合反应，而后检测酶标板的荧光强度；

步骤3)中，所述利用牛血清白蛋白包被标记有羧基修饰的量子点的荧光微球，包括以下步骤：在磷酸盐缓冲液中将标记有羧基修饰的量子点的荧光微球与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、牛血清白蛋白混合，至溶液中牛血清白蛋白的质量体积分数为0.8％～1.2％，于35～39℃反应25～35min，而后补加1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺3～5次，每次补加后于35～39℃反应25～35min，补加全部完成后固液分离取固相，洗涤后溶解于碳酸氢钠溶液中；

步骤3)中，所述偶联包括以下步骤：在无水四氢呋喃环境下，取二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、赭曲霉毒素A混合活化；收集活化后的赭曲霉毒素A，按照活化后的赭曲霉毒素A与所述包被产物上牛血清白蛋白二者摩尔比为1:8～1:12将赭曲霉毒素A与所述包被产物混合，在pH为8.4～8.8、室温条件下反应10～14h，收集产物，洗涤后溶解于水中。

2.根据权利要求1所述的一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于所述量子点是CdSe/ZnS量子点。

3.根据权利要求1所述的一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于所述量子点的激发波长为450nm、发射波长为620nm。

4.根据权利要求1所述的一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于所述标记有羧基修饰的量子点的荧光微球，其粒径为250nm，其最大荧光发射波长620nm。

5.根据权利要求1所述的一种针对赭曲霉毒素A的灵敏检测方法，其特征在于氯仿的去除是利用旋蒸实现的。