[发明专利]风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法

权利要求书

1.风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征包括下述步骤：

(1)参照物溶液的制备：精密称取牛蒡苷对照品适量，加30～70％甲醇制成每1ml含牛蒡苷60～80μg的溶液，即得；

(2)供试品溶液的制备：取风热感冒颗粒，研细，取1～3g，精密称定，精密加入30～70％甲醇25～75ml，称定重量，超声处理15～45分钟，待溶液冷却至室温，用30～70％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22～0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

(3)色谱条件：采用ZORBAX SB-C18色谱柱，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm；流动相为以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的时间及流动相比例为：0～10min，A相：5％、B相：95％；10～20min，A相：5～10％、B相：95～90％；20～50min，A相：10～20％、B相：90～80％；50～65min，A相：20～30％、B相：80～70％；65～75min，A相：30～45％、B相：70～55％；75～77min，A相：45～5％、B相：55～95％；流速为0.5～1.5ml/min；DAD检测器，检测波长为205～285nm；柱温25～45℃，理论板数均不低于10000；

(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到风热感冒颗粒的HPLC特征图谱。

2.根据权利要求1所述的风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：

步骤(1)取参照物溶液浓度为每1ml 50％甲醇溶液含牛蒡苷对照品70μg。

3.根据权利要求1所述的风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：

步骤(2)取风热感冒颗粒，研细，取约2g，精密称定，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22～0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

4.根据权利要求1所述的风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：

步骤(4)采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由17个共有峰构成的风热感冒颗粒HPLC对照特征图谱，所述共有峰中峰3为腺苷峰，峰5为绿原酸峰，峰13为橙皮苷峰，峰15为连翘苷峰，峰16为牛蒡苷峰。

5.根据权利要求1所述的风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是，还包括：

步骤(5)上述步骤(1)-(4)同法操作，得到的样品特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件与对照特征图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品。

6.根据权利要求5所述的风热感冒颗粒HPLC特征图谱的构建方法，其特征是对照特征图谱中，以牛蒡苷峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在第一规定值的±5％之内，所述第一规定值分别为：0.15-峰1、0.23-峰2、0.27-峰3、0.29-峰4、0.40-峰5、0.43-峰6、0.57-峰7、0.69-峰8、0.73-峰9、0.74-峰10、0.81-峰11、0.84-峰12、0.89-峰13、0.91-峰14、98-峰15、1.00-峰S、1.06-峰17。