[发明专利]盐酸帕唑帕尼中间体相关杂质的分析测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体公开了测定盐酸帕唑帕尼合成路线中3种关键中间体的相关杂质的高效液相色谱分析方法。这3种关键中间体分别是：

中间体I：2,3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑；

中间体II：N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺；

中间体III：N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺。

背景技术

盐酸帕唑帕尼，化学名为5-({4-〔(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)(甲基)氨基〕-嘧啶-2-基}氨基)-2-甲基苯磺酰胺盐酸盐，分子式为C₂₁H₂₃N₇O₂S·HCl，分子量为473.98，其结构式如下：

盐酸帕唑帕尼是第二代多靶点酪氨酸激酶抑制剂，对血管内皮生长因子受体、血小板源性生长因子受体等有明显的抑制作用。盐酸帕唑帕尼由葛兰素史克公司开发，于2009年10月获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准在美国的上市，商品名为Votrient，用于治疗晚期肾细胞癌、软组织肉瘤、晚期卵巢癌等疾病，是疗效显著的抗肿瘤激酶抑制剂。

盐酸帕唑帕尼的合成路线在专利WO02059110、WO03106416、WO2007064752、WO2009062658等诸多文献中均有报道。尽管工艺参数有所不同，但合成路线基本一致，即先由2,3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑(中间体I)与2,4-二氯嘧啶通过取代反应生成N-(2-氯嘧啶-4-基)-2，3-二甲基-2H-吲唑-6-胺(中间体II)，继而通过甲基化反应生成N-(2-氯嘧啶-4-基)-N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-胺(中间体III)，最后再与5-氨基2-甲基苯甲酰胺通过取代反应生成盐酸帕唑帕尼。在该反应路线中，中间体I、II、III是构成产品结构的重要组成部分，且处于靠近反应终点的合成路线下游，因此应视为关键中间体。

目前，各国药典均尚未收载盐酸帕唑帕尼的质量标准，其中间体的分析方法在相关文献及专利中也鲜有报道。中间体质量控制对于反应监测和收率提高有着重要作用，同时也影响着终产品的质量。而全面系统地从起始原料到终产品特别是对合成过程中的关键中间体进行质量控制，对于盐酸帕唑帕尼的质量研究与合成工艺的改进具有重要的指导意义，也是本领域目前需要完成的重要工作。为完善中间过程控制，有效分析药品质量，保证用药安全，需要开发出一种便捷、有效检测盐酸帕唑帕尼中间体的相关杂质及含量的分析方法。

发明内容

本发明第一方面提供了一种以高效液相色谱法分析测定盐酸帕唑帕尼中间体Ⅰ即2,3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑相关杂质含量的方法。

具体地，本发明的上述分析方法可按照如下方式实现：

(1)样品配制

供试品溶液：取本品适量，以乙腈水混合溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg中间体Ⅰ的溶液。

(2)色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器

色谱柱：采用十八烷基硅烷键合相硅胶为填充剂的色谱柱；色谱柱粒径为3.5μm；色谱柱长度为150mm；色谱柱内径为4.6mm。

流动相A：pH值为5.0～6.0的磷酸盐缓冲液(优选pH值5.3～5.7，最优选5.4)；磷酸盐缓冲液为5～15mmol/L(优选浓度值8～12mmol/L，最优选10mmol/L)的磷酸二氢钾或磷酸氢二钾水溶液，使用本领域常规浓度的磷酸溶液(≥85％)或氢氧化钾水溶液(1mol/L)调节pH值。

流动相B：乙腈。

本发明一个优选的梯度洗脱程序按下表进行：

流速：0.8ml/min～1.2ml/min，优选0.9ml/min～1.1ml/min，最优选1.0ml/min；

柱温：30℃～40℃，优选33℃～37℃，最优选35℃；

检测波长：215nm；

进样体积：10μl。

优选的梯度洗脱程序