[发明专利]一种同步检测胰腺癌标记物的量子点试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种肿瘤诊断试剂盒，尤其是涉及一种同步检测胰腺癌标记物的量子点试剂盒，属于免疫检测领域。

背景技术

胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，由于早期缺乏典型的临床表现，临床上90%以上的患者确诊时已经属于中晚期，失去最佳治疗时机，其5年生存率仅为5%。因此，实现对胰腺癌的早期诊断，提高胰腺癌患者的生存率是治疗该疾病的关键。

免疫层析试纸条检测也称为免疫侧向层析，是一种快速、简便、灵敏、直观、价格低廉，并可进行现场检测的方法。具有放射性免疫、酶联免疫吸附法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳等仪器检测方法所不具备的优点，在检测技术中处于重要地位，是对传统和大型仪器检测方法的有力补充。随着社会的发展，人类对生活质量有了更高的要求，免疫层析检测技术在面对人类疾病、环境污染物、食品安全、动物医学等重大问题时具有重要的作用。

当前免疫层析产品主要是基于胶体金技术而开发的，在医学检验、毒品检测、食品安全检测等领域得到了广泛的应用。但该技术由于存在颗粒粒径均一性差、免疫标记物不稳定、颜色单一、只能单指标检测、难以实现准确定量检测和灵敏度低等不足，无法满足人们的需求。因此，发明高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉的免疫层析检测方法十分必要。

量子点（QDs）是一种半导体纳米晶，其激发光谱宽，呈连续分布，而发射光谱窄，单色性好且颜色可调，并且具有持久的光化学稳定性，其独特的光学性质使其作为一种新型的荧光探针而得到广泛关注。因此，本发明用量子点取代传统的胶体金作为标记物可以弥补胶体金标记的不足，发明高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉的免疫层析方法，提高胰腺癌阳性检测率。

发明内容

为克服现有技术中的不足，本发明提供了一种利用量子点荧光免疫层析试纸条，联合检测胰腺癌标记物的试剂盒，该试剂盒具有高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉等特点。通过同时检测CA19-9、CEA、CA242三种肿瘤标记物，大大提高检测胰腺癌的速度和效率，相对于单检试剂盒具有灵敏度高及特异性强等优势。同时，每种肿瘤标记物的荧光颜色不同，在紫外灯照射下，结果判断更加直观。

本发明实现其目的采用如下技术方案：

1、一种同步检测胰腺癌标记物的量子点试剂盒，包括试纸条、吸滴管、检测液Ⅰ、检测液Ⅱ、检测液Ⅲ、稀释液、样本稀释杯和存贮介质。其特征在于：所述的试纸条自下而上依次由样品垫、反应膜和吸水垫连接在一起后固定于背衬上而组成；其中，所述的硝酸纤维素膜上含有由CA19-9单克隆抗体、CEA单克隆抗体、CA242单克隆抗体分别包被而成的三条T线即检测线和一条由羊抗鼠IgG包被而成的C线即质控线。

其中，所述检测液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为QD530 nm量子点标记的CA19-9单克隆抗体、QD610 nm量子点标记的CEA单克隆抗体、QD652 nm量子点标记的CA242单克隆抗体。稀释液组分为0.5～1.0%吐温Tween-20、1.5～2%牛血清白蛋白BSA、0.02～0.05%proclin300的0.01M PBS缓冲溶液。

优选的，所述的硝酸纤维素膜上的3条检测线和1条质控线分别按照以下次序排列而成：从靠近吸水垫一端到靠近样品垫一端依次为羊抗鼠IgG质控线（C）、CA19-9单克隆抗体（T1）检测线、CEA单克隆抗体（T2）检测线和CA242单克隆抗体（T3）检测线。

所述反应膜为硝酸纤维素膜。

所述的背衬为各种硬质的支持物，仅在紫外照射下无荧光且具有负载和支持的功能均可用于本发明。

本发明所述的量子点可为Ⅱ-Ⅳ族元素组成的化合物，如CdS、CdSe、CdTe、ZnS、ZnSe等，以及它们组成的核壳式量子点（如CdSe@CdS、CdSe@ZnS等）的任意一种，且均为水溶性羧基量子点。

本发明所述同步定量胰腺癌肿瘤标记物的量子点免疫层析试纸条的制备方法包括如下步骤：

1）量子点标记抗体的制备；

A、取不同波长量子点分别用磷酸缓冲液调节pH=6～8，加入EDC和sulfo-NHS（QDs: EDC的摩尔比为1:50～1:200；EDC: sulfo-NHS的摩尔比为1:1～5:1），涡旋振荡均匀，室温活化15～60 min；

B、分别对应加入胰腺癌标记物的相应抗体（CA19-9单抗、CEA单抗、CA242单抗，且QDs和抗体的摩尔比为1:4～1:10），室温振荡反应1～4 h；