[发明专利]一种树木茎干组织的石蜡切片方法有效
申请号: | 201610965041.3 | 申请日: | 2016-11-04 |
公开(公告)号: | CN106525530B | 公开(公告)日: | 2019-07-12 |
发明(设计)人: | 徐军亮;章异平;苏维;许晓利;朱文琰 | 申请(专利权)人: | 河南科技大学 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N1/30 |
代理公司: | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人: | 胡云飞 |
地址: | 471003 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 软化 茎干 切片 易碎 软化处理 石蜡切片 组织固定 包埋 木质部 树木 切片技术 温水浸泡 显微组织 不一致 粗切削 混合液 韧皮部 甘油 染色 乙醇 封片 复水 浸蜡 烤片 脱蜡 粘片 展片 脱水 成功率 透明 试验 | ||
1.一种树木茎干组织的石蜡切片方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)组织固定:
将树木茎干组织浸于固定液中固定;步骤(1)中茎干组织取自树木胸径处,组织大小为直径1.5~2.5mm,长度15~20mm;所述茎干组织包含韧皮部、形成层和3~5年的木质部区域;
(2)一次软化:
将固定后的组织浸于体积比1:1的70%乙醇与甘油的软化液中软化;步骤(2)中软化的时间为1~4周;
(3)组织脱水:
具体操作为:1)在35%乙醇中保持1h;2)在70%乙醇中保持1h;3)在90%乙醇中保持50min;4)重复步骤3)中操作1次;5)在95%乙醇中保持50min;6)在100%乙醇中保持40min;7)重复步骤6)中操作1次;
(4)组织透明:
具体操作为:1)在体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中保持40min;2)在二甲苯中保持40min;3)重复步骤2)中操作1次;
(5)浸蜡和包埋:
将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡,浸蜡后包埋;
(6)二次软化:
将包埋后的组织浸于30℃的水中半小时至一周软化;
(7)切片、展片、粘片和烤片;
(8)脱蜡和复水:
切片组织用二甲苯脱蜡处理后,再依次用浓度梯度为100%、95%、70%的乙醇和水复水;复水的具体操作为:1)在100%乙醇中保持20s;2)在95%乙醇中保持20s;3)在70%乙醇中保持20s;4)在蒸馏水中保持20s;
(9)染色和封片:采用番红-固绿染色法染色,封片即可;染色的具体操作为:1)在1%番红水溶液中保持15~20min;2)在蒸馏水中保持10s;3)在70%乙醇中保持10s;4)重复步骤3)中操作3次;5)在0.5%固绿的95%乙醇溶液中保持30s;6)在95%乙醇中保持10s;7)重复步骤6)中操作1次;8)在无水乙醇中保持10s;9)重复步骤8)中操作1次。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中固定液由体积比为9:0.5:0.5的70%乙醇、甲醛和乙酸组成。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(5)中浸蜡的具体操作为:
1)在液体石蜡中保持20min;
2)在液体石蜡中保持30min;
3)重复步骤2)中操作1次。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(8)中脱蜡的具体操作为:
1)在二甲苯中保持5~10min;
2)重复步骤1)中操作3次。
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