[发明专利]一种树木茎干组织的石蜡切片方法

权利要求书

1.一种树木茎干组织的石蜡切片方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）组织固定：

将树木茎干组织浸于固定液中固定；步骤（1）中茎干组织取自树木胸径处，组织大小为直径1.5~2.5mm，长度15~20mm；所述茎干组织包含韧皮部、形成层和3～5年的木质部区域；

（2）一次软化：

将固定后的组织浸于体积比1:1的70%乙醇与甘油的软化液中软化；步骤（2）中软化的时间为1~4周；

（3）组织脱水：

具体操作为：1）在35%乙醇中保持1h；2）在70%乙醇中保持1h；3）在90%乙醇中保持50min；4）重复步骤3）中操作1次；5）在95%乙醇中保持50min；6）在100%乙醇中保持40min；7）重复步骤6）中操作1次；

（4）组织透明：

具体操作为：1）在体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中保持40min；2）在二甲苯中保持40min；3）重复步骤2）中操作1次；

（5）浸蜡和包埋：

将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡，浸蜡后包埋；

（6）二次软化：

将包埋后的组织浸于30℃的水中半小时至一周软化；

（7）切片、展片、粘片和烤片；

（8）脱蜡和复水：

切片组织用二甲苯脱蜡处理后，再依次用浓度梯度为100%、95%、70%的乙醇和水复水；复水的具体操作为：1）在100%乙醇中保持20s；2）在95%乙醇中保持20s；3）在70%乙醇中保持20s；4）在蒸馏水中保持20s；

（9）染色和封片：采用番红-固绿染色法染色，封片即可；染色的具体操作为：1）在1%番红水溶液中保持15~20min；2）在蒸馏水中保持10s；3）在70%乙醇中保持10s；4）重复步骤3）中操作3次；5）在0.5%固绿的95%乙醇溶液中保持30s；6）在95%乙醇中保持10s；7）重复步骤6）中操作1次；8）在无水乙醇中保持10s；9）重复步骤8）中操作1次。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中固定液由体积比为9:0.5:0.5的70%乙醇、甲醛和乙酸组成。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（5）中浸蜡的具体操作为：

1）在液体石蜡中保持20min；

2）在液体石蜡中保持30min；

3）重复步骤2）中操作1次。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（8）中脱蜡的具体操作为：

1）在二甲苯中保持5~10min；

2）重复步骤1）中操作3次。