[发明专利]一种树木茎干组织的石蜡切片方法

说明书

本发明公开了一种树木茎干组织的石蜡切片方法，属于植物显微组织切片技术领域。该包括组织固定、一次软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、二次软化、切片、展片、粘片、烤片、脱蜡、复水、染色和封片等操作，其中增加软化处理能够解决茎干组织中韧皮部、形成层和木质部三者因硬度不一致而导致切片过程中组织易碎等问题。软化处理包括两步操作，一是在组织固定后，增加用乙醇/甘油混合液软化组织的操作，二是在包埋粗切削后，增加用温水浸泡的操作，以软化待切组织。试验证明，软化组织可以降低切片中茎干组织易碎的机率，提高切片成功率。

技术领域

本发明涉及一种树木茎干组织的石蜡切片方法，属于植物显微组织切片技术领域。

背景技术

石蜡切片在组织学常规制片技术中应用最为广泛，主要用于细胞组织的形态观察，制成的切片经封片后制成永久性切片装片，可长期保存。

树木茎干组织石蜡切片技术是研究树木径向生长及生理生态机理的重要实验技术。树木茎干组织包括木质部、形成层和韧皮部三部分，这三者的硬度不一致。木质部通常材质坚硬，细胞壁厚；形成层的细胞及伸长细胞组织较软，水分含量高，细胞壁薄；而韧皮部组织的细胞壁相对较薄。

常规的植物组织石蜡切片方法包括固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片染色等步骤，而该方法通常适用于水分含量适中、硬度较一致的组织，如叶片、木材等。如公布号CN105699142A的发明专利公开的一种用于质地紧密坚硬植物材料的石蜡切片制作方法，包括：1)固定：将植物籽粒材料纵切或横切后放入固定液中，抽真空至籽粒沉入容器底部，室温固定3～5h；2)脱水：固定后的材料依次置于30％、50％、75％、95％、100％浓度的乙醇中脱水；3)透明：脱水后的材料依次置于酒精、氯仿体积比3:1、1:1、1:3的混合液以及纯氯仿中静置透明；4)浸蜡：透明后的材料依次置于氯仿、石蜡体积比3:1、1:1、1:3的混合液以及纯石蜡中浸蜡；5)浸蜡后的材料按常规方法包埋、切片即可。但是，对于组织硬度不一致的树木茎干，采用常规制片的效果尚不够理想，主要表现为切片过程中材料易碎或者组织被破坏。并且常规切片方法的操作复杂，耗时较长。

因此，针对材料坚硬且硬度不一致的树木茎干组织，需要从方法学角度对石蜡切片技术进行调整和完善。

发明内容

本发明的目的是提供一种树木茎干组织的石蜡切片方法，以解决茎干组织中韧皮部、形成层和木质部三者因硬度不一致而导致切片过程中组织易碎的技术问题。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种树木茎干组织的石蜡切片方法，包括以下步骤：

(1)组织固定：

将树木茎干组织浸于固定液中固定；

(2)一次软化：

将固定后的组织浸于体积比1:1的70％乙醇与甘油的软化液中软化；

(3)组织脱水：

将软化后的组织依次浸于浓度梯度为35％、70％、90％、95％、100％的乙醇中脱水，每个梯度至少处理40min；

(4)组织透明：

将脱水后的组织先浸于体积比1:1的100％乙醇与二甲苯的混合液中，再浸于二甲苯中透明；

(5)浸蜡和包埋：

将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡，浸蜡后包埋；

(6)二次软化：

将包埋后的组织浸于水中半小时至一周软化；

(7)切片、展片、粘片和烤片；

(8)脱蜡和复水：