[发明专利]一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法

权利要求书

1.一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法，采用超高效液相色谱法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备：取延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱对照品，分别用甲醇配制成甲醇溶液；

步骤2，供试品溶液的制备：取养血清脑醇提浸膏0.3g，精密称定，加入含0.5-5％乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL，超声溶解，上至固相萃取柱，所述固相萃取柱为ProElut PXC固相萃取柱，先用含0.5-5％乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL洗涤，再用10ml甲醇洗涤，洗涤液弃去，用含2-10％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用含2-10％氨水的甲醇溶液定容至10mL，摇匀，即得；

步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据峰面积计算生物碱成分的含量；

其中，色谱条件如下：色谱柱：表面带电杂化颗粒UPLC色谱柱，流动相：流动相A为0.02-0.1％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；流速：0.35-0.45ml/min，检测波长：275-285nm,

所述梯度洗脱程序如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤1所述对照品溶液的制备，方法如下：分别精密称取延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱对照品适量，加甲醇溶解，制得每毫升含延胡索乙素和延胡索甲素分别为0.01mg、0.02mg、0.01mg、0.005mg和0.005mg的溶液，即得。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤2所述供试品溶液的制备，方法如下：取养血清脑醇提浸膏0.3g，精密称定，加入含0.5-3％乙酸的60-70％甲醇水溶液10mL，超声溶解，上至固相萃取柱，先用含0.5-3％乙酸的60-70％甲醇水溶液10mL洗涤，再用10ml甲醇洗涤，洗涤液弃去，用含2-10％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用含2-10％氨水的甲醇溶液定容至10mL，摇匀，即得。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中，步骤2所述供试品溶液的制备，方法如下：取养血清脑醇提浸膏0.3g，精密称定，加入含1％乙酸的65％甲醇水溶液10mL，超声溶解，上至固相萃取柱，先用含1％乙酸的65％甲醇水溶液10mL洗涤，再用10ml甲醇洗涤，洗涤液弃去，用含5％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用含5％氨水的甲醇溶液定容至10mL，摇匀，即得。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，步骤3中，色谱条件如下：色谱柱：ACQUITY UPLC CSH C18色谱柱，1.7um，2.1×100mm，流动相：流动相A为0.05％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；流速：0.4ml/min，检测波长：280nm。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：对照品溶液的制备

分别精密称取延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱对照品适量，加甲醇溶解，制得每毫升含延胡索乙素、延胡索甲素四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱分别为0.01mg、0.02mg、0.01mg、0.005mg和0.005mg的溶液，即得；

步骤2：供试品溶液的制备

取养血清脑醇提浸膏0.3g，精密称定，加含0.5-5％乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL，超声溶解，上至固相萃取柱，先用含0.5-5％乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL洗涤，再用10ml甲醇洗涤，洗涤液弃去，用含2-10％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用含2-10％氨水的甲醇溶液定容至10mL，摇匀，即得；

步骤3：测定法

分别取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算含量；

所述的液相色谱仪色谱条件如下：

色谱柱：表面带电杂化颗粒UPLC的色谱柱，ACQUITY UPLC CSH C18；流动相：流动相A为0.02-0.1％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱条件如下；流速：0.35-0.45ml/min，检测波长：275-285nm；

所述梯度洗脱程序如下：

上述方法中：

所述固相萃取柱为ProElut PXC，500mg/6mL。