[发明专利]一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法，采用高效液相色谱法，所述方法包括以下步骤：步骤1，对照品溶液的制备；步骤2，供试品溶液的制备；步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据峰面积计算生物碱成分的含量。本发明采用超高效液相色谱法对养血清脑醇提浸膏中生物碱成分进行测定。采用固相萃取技术对样品进行分离纯化，能够有效去除干扰成分，同时可以对生物碱成分进行有效富集。该方法高效快速，稳定性好，灵敏度高、能够在7分钟内实现五种生物碱成分的有效分离。经方法学验证，本发明的质量控制方法精密度、重现性、稳定性良好，能够有效测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分。

技术领域

本发明属于药物检测领域，涉及一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法。

背景技术

养血清脑制剂是由当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛十一味中药和辅料组成，养血清脑水提浸膏是养血清脑颗粒和养血清脑丸的制剂中间体。制备工艺为：当归、川芎、延胡索、决明子加乙醇加热回流提取，滤过，除杂，回收乙醇并浓缩至适量，即得养血清脑醇提浸膏。

《中国药典》2015年版公开了养血清脑两种制剂的含量检测，都是对养血清脑水提浸膏中芍药苷的检测，其中对芍药苷的检测方法为：其供试品的制备方法：取本品内容物，研细，取约0.08g，精密称定，置20ml烧杯中，加0.2％碳酸氢钠，超声处理5分钟，通过D101大孔吸附树脂柱，用水洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，加水至刻度，摇匀，离心5分钟，取上清液，滤过，取续滤液，即得；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以异丙醇-甲醇枸橼酸溶液(2：18：80)为流动相，检测波长为240nm，理论板数按照芍药苷峰计算应不低于2000。

发明人针对养血清脑醇提浸膏中的生物碱成分进行了深入研究，利用SPE-UPLC方法，建立了生物碱成分的分离纯化方法，实现生物碱成分的有效分离。采用串联四级杆飞行时间质谱(Q-TOF/MS)液质联用仪对养血清脑醇提浸膏中的生物碱成分进行了结构鉴定，通过对一级、二级碎片分析和对照品比对，确定了其中的五种生物碱成分，分别为延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱。

为进一步提升产品质量控制水平，全面掌握产品质量，发明人针对养血清脑醇提浸膏中的生物碱成分建立了含量测定方法，并进行了方法学验证。

发明内容

本发明提供的一种测定养血清脑醇提浸膏中生物碱成分含量的方法，采用高效液相色谱法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备：取延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱对照品，分别用甲醇配制成甲醇溶液；

步骤2，供试品溶液的制备：取养血清脑醇提浸膏，用用含乙酸的甲醇水溶液溶解，上柱洗脱，再用氨水甲醇配制成供试品溶液；

步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据峰面积计算生物碱成分的含量。

上述方法中，步骤1-2的顺序不是时间顺序上的限制，可以相互置换。

其中，步骤1所述对照品溶液的制备，方法如下：分别精密称取延胡索乙素、延胡索甲素、四氢非洲防己碱、四氢黄连碱和四氢小檗碱对照品适量，加甲醇溶解，制得每毫升含延胡索乙素和延胡索甲素分别为0.01mg、0.02mg、0.01mg、0.005mg和0.005mg的溶液，既得.

其中，步骤2所述供试品溶液的制备，方法如下：取养血清脑醇提浸膏约0.3g，精密称定，加入含0.5-5％的乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL，超声溶解，上至固相萃取柱，先用含0.5-5％乙酸的55-75％甲醇水溶液10mL洗涤，再用10ml甲醇洗涤，洗涤液弃去，用含2-10％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，用含2-10％氨水的甲醇溶液定容至10mL，摇匀，即得。