[发明专利]血吸虫感染性钉螺检测方法及该方法所用的试剂盒和引物

权利要求书

1.一种用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括LAMP引物组、反应混合液以及DNA聚合酶；

所述反应混合液中含有羟基萘酚蓝作为指示剂；

所述LAMP引物组包括F3和B3组成外引物对和FIP和BIP组成的内引物对；

所述F3、B3、FIP以及BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1～4所示；

所述引物组还包括一条LF环引物，所述LF环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述反应混合液包括如下成分：

pH为8.6～9.0的15mM～25mM Tris–HCl、1.2mM～1.6mM dNTPs、8mM～12mM KCl、100μM～140μM羟基萘酚蓝、8mM～12mM(NH₄)₂SO₄、6mM～10mM MgSO₄、0.6M～1.0M甜菜碱以及体积百分数为0.07％～0.13％的Tween 20。

3.根据权利要求1所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活性单位为16U/μL。

4.根据权利要求1所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述外引物对、内引物对与环引物的摩尔比为1:(7～9)：(3～5)。

5.根据权利要求1所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括去离子水。

6.根据权利要求1所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准血吸虫DNA的阳性对照。

7.一种用于非疾病诊断目的的血吸虫感染性钉螺检测方法，其特征在于，包括：

提取待检测的钉螺基因组DNA，添加权利要求1～6任一项所述的试剂盒中的试剂进行恒温反应；反应过程中观察反应液的颜色变化，浅紫色的为阴性反应，天蓝色为阳性反应。

8.根据权利要求7所述的血吸虫感染性钉螺检测方法，其特征在于，所述恒温反应的条件为：

60℃～65℃恒温反应40min～80min。