[发明专利]血吸虫感染性钉螺检测方法及该方法所用的试剂盒和引物

说明书

本发明涉及寄生虫病传播媒介检测领域，具体而言，涉及一种血吸虫感染性钉螺检测方法及该方法所用的试剂盒和引物。所述试剂盒包括权利要求2所述的LAMP引物组、反应混合液以及DNA聚合酶；所述反应混合液中含有羟基萘酚蓝作为指示剂。所述LAMP引物组包括F3和B3组成外引物对和FIP和BIP组成的内引物对；还包括一条LF环引物。利用该检测方法的试剂盒可以有效、快速、高特异地对血吸虫感染性钉螺进行检测。

技术领域

本发明涉及寄生虫病传播媒介检测领域，具体而言，涉及一种血吸虫感染性钉螺检测方法及该方法所用的试剂盒和引物。

背景技术

血吸虫也称裂体吸虫(schistosoma)。血吸虫寄生于多数脊椎动物，卵穿过静脉壁进入膀胱，随尿排出。幼虫在中间宿主螺类体内发育。成熟幼虫通过皮肤或口进入终宿主体内。曼森氏裂体吸虫(S.mansoni,即曼氏血吸虫)在大、小肠静脉中，主要分布于非洲和南美洲北部。卵随粪便排出。幼虫进入螺体，再通过皮肤回到终宿主体内。日本裂体吸虫(S.japonicum,即日本血吸虫)主要见于中国大陆、日本、台湾、东印度群岛和菲律宾，除人外，还侵袭其他脊椎动物，如家畜和大鼠等。埃及裂体吸虫(S.Haematobium，即埃及血吸虫)主要分布于非洲、南欧和中东。埃及血吸虫生活在膀胱静脉内，卵穿过静脉壁进入膀胱，随尿排出。

钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主，是日本血吸虫病的唯一的传播媒介。消灭血吸虫感染性钉螺可以阻断血吸虫病的传播与流行。对血吸虫感染性钉螺的分布进行调查，有选择性地进行化学灭螺是提高血吸虫病传播阻断效果，最大限度地保护生态平衡的一个重要手段。

血吸虫感染性钉螺的现有检测方法有肉眼观察法、压片镜检法、孵化法、循环抗原检测法等。这些方法具有程序繁琐、周期长、成本高、特异性差等缺点。环介导等温扩增法(LAMP)是近年发展起来的新型核酸检测技术，作为一种恒温核酸扩增技术，环介导等温扩增法具有检测特异性好、灵敏度高、时间短、无需热循环设备等优点，而在病原体检测中得到广泛应用。扩增结果的判定方法有3种：(1)琼脂糖电泳后，用EB或SYBR Green I等染色检验是否有梯状条带；(2)肉眼观测副产物焦磷酸镁沉淀，产物呈阳性的反应的可见管内液体浑浊或者离心后在管底见白色沉淀；(3)产物中加SYBR Green I或其他类似双链DNA染料，肉眼观察颜色反应，呈绿色的为阳性反应。

然而，现有的环介导等温扩增法在应用于血吸虫感染性钉螺方面还存在一些亟需改善的地方，由于LAMP使用的引物较多，所以更容易产生引物二聚体，因此使用常规的SYBRGreen等荧光染色试剂常常会造成结果的假阳性；扩增结果的观察，需要反应结束后将显色试剂加入，才能观察结果，不能实时观察反应结果，开盖行为还容易使得扩增得到的高浓度DNA对实验环境造成污染。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血吸虫感染性钉螺检测方法及该方法所用的试剂盒和引物，以解决上述问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

用于检测血吸虫感染性钉螺的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括F3和B3组成外引物对和FIP和BIP组成的内引物对；

所述F3、B3、FIP以及BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1～4所示。

优选的，如上所述的用于检测血吸虫感染性钉螺的LAMP引物组，所述引物组还包括一条LF环引物，所述LF环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。