[发明专利]一种来源于Aquifex aeolicus菌株的嗜热酯酶及其功能验证

权利要求书

1.一种表达嗜热酯酶的基因工程菌或者转基因细胞系，其特征在于，所述基因工程菌或转基因细胞系表达氨基酸序列如1)或2)所示的基因：

1)氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的序列；或

2)氨基酸序列是在1)限定的序列基础上经氨基酸的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的酯酶的序列。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以毕赤酵母、大肠杆菌或者巨大芽孢杆菌为宿主构建得到的。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母为GS115、KM71或SMD1168；所述大肠杆菌为BL21、Rosctta 2、Origami 2、Rosctta-gami 2或Origami B；所述巨大芽孢杆菌为WH320、MS941或YYBm1。

4.一种表达嗜热酯酶的重组载体，其特征在于，所述重组载体含有氨基酸序列如1)或2)所示的基因：

1)氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的序列；或

2)氨基酸序列是在1)限定的序列基础上经氨基酸的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的酯酶的序列。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体是在pPIC9，pPIC3K，pPIC9K，PAO815、pPICZα、pET 28T、MBP3、pBR系列、pUC系列、pAT153载体、pHIS1525、pHIS1522、pSTREP1525、pSTREPHIS1525或者pSTOP 1622的基础上构建得到的。

6.一种生产嗜热酯酶的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求4所述的表达嗜热酯酶的重组载体、权利要求1所述的表达嗜热酯酶的基因工程菌或者权利要求1所述的表达嗜热酯酶的转基因细胞系。

7.权利要求4所述的表达嗜热酯酶的重组载体、权利要求1所述的表达嗜热酯酶的基因工程菌或者权利要求1所述的表达嗜热酯酶的转基因细胞系的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用是应用于食品加工、生物催化、制备药物、皮革制造、动物饲料、化妆品或者污水治理领域。

9.一种水解対硝基苯酚类或者甘油脂类底物的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求4所述的表达嗜热酯酶的重组载体、权利要求1所述的表达嗜热酯酶的基因工程菌或者权利要求1所述的表达嗜热酯酶的转基因细胞系表达氨基酸序列如1)或2)所示的基因，以基因表达产物为催化剂进行水解；其中基因：

1)氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的序列；或

2)氨基酸序列是在1)限定的序列基础上经氨基酸的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的酯酶的序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述対硝基苯酚类底物为p-NPC₄、p-NPC₅、p-NPC₈、p-NPC₁₂、p-NPC₁₄或者p-NPC₁₆；所述甘油脂类底物为三乙酸甘油脂、三丁酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三葵酸甘油酯、三酸肉豆蔻甘油酯、三棕榈酸甘油酯或者橄榄油。