[发明专利]一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法

权利要求书

1.一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，其特征在于，步骤为：

1）建立鲈鱼精子冷冻库：在鲈鱼性成熟期，选择发育至可产精液的雄性鲈鱼，采集精液，对活力达到80%以上的精子进行冷冻保存，建立精子冷冻库；

对精子进行冷冻保存的方法为，将精液与冷冻保存液以体积比1:1的比例混合，分装到冷冻保存管中，然后放入-196℃的液氮中冷冻保存；所述冷冻保存液的组成为80%的精子稀释液和20%的二甲基亚砜，为体积比；所述精子稀释液的组成为NaCl 3.526g/L，NaH₂PO₄ 0.281g/L，NaHCO₃ 0.252g/L，KCl 0.389g/L，D-Glucose 10.0g/L；

2）精子遗传物质灭活：将冷冻精子从液氮中取出并解冻；对精子进行紫外线灭活处理，使精子遗传物质失活，精子的活力保持在30-40%；

3）星斑川鲽未受精卵的采集及授精：选择性成熟的星斑川鲽雌鱼，每天5:00、17:00采卵，将上述灭活的鲈鱼精液加入星斑川鲽卵中，轻轻摇动混匀，精液和卵的受精最小体积比为100µL：4mL，加入2倍体积于卵量的海水受精，海水温度为13-14℃；

4）受精卵压力休克诱导：在受精后5min，将受精卵注入压力容器中，快速将压力提升至60MPa，压力提升时间为8-10s，静水压持续时间10min，之后缓慢释放压力；

5）雌核发育卵的培养：将上述经过压力休克后的星斑川鲽受精卵利用海水清洗、沉淀过滤、除去沉淀死卵，将上浮受精卵加入13-14℃的海水，放在网箱中孵化培养。

2.根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，其特征在于，步骤2）中紫外线灭活处理是将冷冻精液与精子稀释液以1:5的体积比稀释，平铺于培养皿中，将培养皿置于紫外交联仪中，利用80mj/cm²紫外线照射。

3.根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，其特征在于，步骤3）中对发育迟缓的雌鱼注射促黄体素释放激素A210μg/kg，促进星斑川鲽雌鱼性成熟。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，其特征在于，步骤5）中网箱中孵化培养过程，孵化水温13.5-14.0℃，溶氧量保持在5.0-9mg/L；每日检查卵的发育情况，待发育至出膜前期，收集网箱中成活卵进行鱼苗培育。