[发明专利]一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法

说明书

本发明公开了一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，步骤为：1）建立鲈鱼精子冷冻库；2）精子遗传物质灭活；3）星斑川鲽未受精卵的采集及授精；4）受精卵压力休克诱导；5）雌核发育卵的培养。本发明的方法，有利于提高星斑川鲽雌核发育的受精率和发育率，建立了星斑川鲽雌核发育群体。

技术领域

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及是一种培育全雌性、生长快速的星斑川鲽新种质的育种技术。

背景技术

星斑川鲽(Platichthys stellatus)主要分布于北太平洋的亚洲和美洲沿岸，主要分布国家有加拿大，美国，俄罗斯，中国、朝鲜、韩国和日本等。星斑川鲽对水温和盐度的变化具有较强的忍耐力，适应温度范围广，抗逆性强，养殖成活率高，体态浑厚，体色艳丽喜人，具有极高的经济价值，是继大菱鲆(Scophthalmus maximus)、牙鲆(Paralichthysolivaceus)和半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)之后极具养殖潜力的优良品种，也是我国海水鱼类增殖放流的重要鱼类之一。星斑川鲽雌雄性生长差异较大，2龄雌性体重较雄性重2.48倍以上(中国水产科学研究院黄海水产研究所，田永胜等，海洋学报，2016)，生长较慢的雄性鱼类对于提高养殖产量、扩大养殖规模具有一定的限制作用。因此研发生长快的星斑川鲽全雌鱼苗，对于扩展本品种的养殖规模和提高养殖经济效益具有重要的现实意义。雌核发育是单性生殖的一种，指卵子依靠自己细胞核内遗传物质发育成个体的生殖行为。通过雌核发育可以达到制备全雌性鱼类遗传后代的目的，为鱼类遗传育种创造有价值的繁育群体。雌核发育现象发现于天然鱼类亚马逊花鳉(Poecilia formosa)，分布于我国的方正银鲫、彭泽鲫等也属于天然雌核发鱼类，中国科学院水生生物研究所的桂建芬等(1996)对银鲫天然雌核发育机理进行了大量的研究。中国科学院水生生物研究所吴清江等(1981)在鲤鱼上最早建立了雌核发育技术。德国New Brunswick大学的Harald B Tvedt(2003)利用欧鲽(Hippoglossoides platessoides)、美洲黄盖鲽(Pleuronectesferrugineus)和美洲拟鲽(P.americanus)精子诱导大西洋大比目鱼(Hippoglossushippoglossus L.)卵雌核发育。北卡罗莱拉州立大学的Luckenbach等(2004)利用同源和异源精子诱导漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)雌核发育，Piferrer等对大菱鲆雌核发育技术进行了研究(Institut de Ciències del Mar,Consejo Superior deInvestigaciones Cientificas,Piferrer et al.,2004)，但是星斑川鲽雌核发育技术方法在国内外还未见报导。

发明内容

本发明涉及一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，首次在在国内外建立了星斑川鲽雌核发育诱导技术，建立了雌核发育群体，这一方法具有操作简单、高效的特点，有利于提高星斑川鲽雌核发育的受精率和发育率，并降低畸形率。

为了实现上述目的，本发明采用下述技术方案予以实现:

一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法，步骤为：

1)建立鲈鱼精子冷冻库：在鲈鱼性成熟期，选择发育至可产精液的雄性鲈鱼，采集精液，对活力达到80-90％以上的精子进行冷冻保存，建立精子冷冻库；

2)精子遗传物质灭活：将冷冻精子从液氮中取出并解冻；对精子进行紫外线灭活处理，使精子遗传物质失活，精子的活力保持在30-40％左右；

3)星斑川鲽未受精卵的采集及授精：选择性成熟的星斑川鲽雌鱼，每天5:00、17:00采卵，将上述灭活的鲈鱼精液加入星斑川鲽卵中，轻轻摇动混匀，精液和卵的受精最小体积比为100μL：4mL，加入2倍体积于卵量的海水受精，海水温度为13-14℃；