[发明专利]人源iPS干细胞体外定向分化为神经细胞的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于体外定向诱导多能干细胞分化为神经细胞的试剂盒，所述试剂盒包括前期培养液，所述前期培养液包括基础培养基DMEM/F12，进一步地，所述前期培养液还包括：

胰岛素 4～11ug/ml；

2-磷酸抗坏血酸酯 40～70mg/ml；

亚硒酸钠 40～80ug/ml；

人类碱性成纤维细胞生长因子 150～200ug/ml；

人类转化生长因子TGFβ1 90～140ug/ml；

转铁蛋白 30～60mg/ml；

NaHCO₃ 4～8wt％；

其中所述前期培养液还包括：1～3μM TZV或8～12μM Y27632。

所述试剂盒还包括完全神经诱导培养液，所述完全神经诱导培养液包括神经培养基底液和神经诱导补给液，其中所述神经培养基底液和神经诱导补给液的体积比为40:1～60:1；

其中所述神经培养基底液为PSC神经培养基底液；

其中所述神经诱导补给液为PSC神经诱导补给液。

2.一种用于体外定向诱导多能干细胞分化为神经细胞的方法，所述方法包括以下阶段：

第一阶段：用预热的如权利要求1所述的试剂盒中的前期培养液传代培养即将用于定向分化的多能干细胞；

第二阶段：用预热的如权利要求1所述的试剂盒中的完全神经诱导培养液替换第一阶段所用的前期培养液，之后每24～48小时更换一次所述完全神经诱导培养液，直至可以采收。

3.如权利要求2所述的方法，在第一阶段中，所述多能干细胞以小团块方式传代。

4.如权利要求2所述的方法，在第一阶段中，还包括对用于传代培养所述多能干细胞的培养皿进行Geltrex预处理。

5.如权利要求2所述的方法，在第二阶段中，还包括用无菌的移液管或移液器移除未神经分化的细胞群落。