[发明专利]一种烟草及烟草制品中马来酰肼残留量的检测方法

权利要求书

1.一种烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，所述烟草及烟草制品包括烟叶和卷烟烟丝，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a）配制标准溶液；

准确称取马来酰肼标准品, 精确至0.0001g，用超纯水溶解定容，制得标准储备液；

稀释标准储备液得到标准工作液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存备用；

用超纯水准确配置氘代内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，冷冻保存；

取一定量的内标标准储备液，用超纯水稀释定容，制得内标标准工作液；

标准工作液和内标标准工作液冷藏保存；

步骤b）盐酸回流提取；

称取试样于圆底烧瓶中，加入盐酸提取液，再加入内标标准工作液；将圆底烧瓶放置于加热套或者油浴锅中，圆底烧瓶上安装球形冷凝管，加热回流；控制回流速度，使蒸汽升至球形冷凝管第二球处，回流稳定后开始计时；

步骤c）分散固相萃取纯化；

从圆底烧瓶中移取上清液于旋盖离心管中，分别向离心管中加入N-丙基乙二胺吸附剂，漩涡振荡混合，吸取上清液经有机相滤膜过滤后用超纯水稀释定容待测；

步骤d）UPLC-MS/MS分析测定；

分别对前述工作液进行UPLC-MS/MS分析，并对各标样峰面积与内标的峰面积的比值（y）和其浓度（x）进行线性回归分析，得到标准曲线；

色谱条件：Atiantis UPLC HSS T3超高效液相色谱柱，柱长100 mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相A：体积分数为0.1%的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1%的甲酸乙腈溶液；流速0.45 mL/min；柱温45 °C；进样量2 µL；

梯度洗脱条件：0~2min，100%A~100%A；2~2.8min，100%A~30%A；2.8~3.0min，30%A~20%A；3.0~4.0min，20%A~5%A；4~6min，5%A~5%A；6~6.1min，5%A~100%A；6.1~8min，100%A~100%A；

质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，喷雾电压（IS）：3.0 kV；离子化温度500 ℃；雾化气流量：800 L/Hr； 锥孔气(cone)流量50 L/Hr； 碰撞气流量为0.15 ml/min； 碰撞气为氩气，其余气体为氮气； 驻留时间为100 msec，正离子MRM模式采集。

2.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤a）中，内标标准储备液为氘代内标，所述氘代内标为马来酰肼-d₂。

3.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，称取试样的重量为5g，精确到0.01g。

4.根据权利要求1或3所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，圆底烧瓶中加入盐酸提取液体积为50mL,浓度为4mol/L，加入氘代内标体积为250 μL，浓度为0.2 mg/mL。

5.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，加热套的温度为180℃。

6.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，油浴锅的温度为150℃。

7.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中，加热回流的时间为1h。

8.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，步骤c）中，所述离心管的体积为2 mL，加入PSA吸附剂的质量为25mg。

9.根据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤c）中，涡旋振荡速率为2000 r/m，时间为2 min。

10.据权利要求1所述的烟草及烟草制品中马来酰肼截留量的检测方法，其特征在于，所述步骤d）中，标准曲线的回归方程为Y=0.001X+0.0022，相关系数r=0.9995。