[发明专利]一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法

权利要求书

1.一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

1)培养基的配制：

(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；

(2)诱导培养基：MS+6-BA 2～6mg/L+NAA 0～0.5mg/L；

(3)分化培养基：MS+6-BA0～0.05mg/L；

(4)增殖培养基：MS+6-BA 0.1～0.3mg/L；

(5)壮苗培养基：MS+NAA 0.05～0.2mg/L；

2)愈伤组织的诱导：选取正常绿色和完全锦化的卧牛无菌苗的叶片为外植体，

将其分别切伤后接种到诱导培养基上进行暗培养诱导愈伤组织；

3)愈伤组织的增殖：将步骤2)中诱导的愈伤组织转接至新鲜的诱导培养基上并

在有光条件下进行增殖；

4)愈伤组织的共培养：将步骤3)增殖获得的正常谱系和锦化谱系的愈伤组织在

无菌条件下分别切成碎块后混合接种至诱导培养基上进行共培养；

5)不定芽的诱导：挑取步骤4)共培养获得的呈黄绿色相间或相连的嵌合愈伤块置

于分化培养基上进行不定芽的诱导培养；

6)斑锦不定芽的增殖：将步骤5)中分化出的斑锦类型再生不定芽转接至增殖培养

基上进行丛生芽的增殖培养；

7)壮苗及移栽：将步骤6)中增殖的斑锦不定芽分割成单株后转接至壮苗培养基上进行壮苗。

2.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤1)中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：

(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH＝5.8；

(2)诱导培养基：MS+6-BA 5mg/L+NAA 0.2mg/L；

(3)分化培养基：MS+6-BA 0.01mg/L；

(4)增殖培养基：MS+6-BA 0.2mg/L；

(5)壮苗培养基：MS+NAA 0.1mg/L。

3.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤2)中，所述的愈伤组织的诱导的培养条件是温度为23±2℃，黑暗。

4.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤4)中，愈伤组织的共培养是分别将正常谱系即绿色，和锦化谱系即黄色的愈伤组织在无菌条件下切成0.2cm见方的碎块，并将两者混合接种至新鲜的诱导培养基上进行共培养以诱导嵌合愈伤组织的产生。

5.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤4)中，所述的不定芽的诱导是挑取两谱系嵌合成功、呈黄绿色相间或相连的愈伤块置于分化培养基上进行不定芽分化。

6.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤5)中，所述的斑锦不定芽的增殖是将分化出的斑锦类型再生不定芽转接至增殖培养基上诱导丛生芽来进一步增殖。

7.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤3)、4)、5)、6)、7)中，所述的培养条件是温度为23±2℃、光照强度为30～80μmol·m^-2·s^-1、光照时间为8～12小时/天。