[发明专利]一种辽刺参低聚肽对小鼠抗疲劳作用的研究方法

说明书

本发明公开了一种辽刺参低聚肽对小鼠抗疲劳作用的研究方法，它涉及生物技术领域；先对辽刺参低聚肽分子量进行检测；实验分组及灌胃剂量选择：选择昆明种小鼠240只，雄性，体重20±2g，随机分为8组，每组30只，10只用于小鼠负重游泳，10只用于测定血清尿素氮，10只用于测定肝糖原，负重游泳实验；血清尿素氮测定：肝糖原的测定：末次灌胃30min后，采用断颈法将小鼠处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，测定；对辽刺参进行酶解等精深加工后，获得分子量小于1000Da的低聚肽。对辽刺参低聚肽和大豆低聚肽及辽刺参粉的抗疲劳程度进行比较，为其进入市场提供科学依据，为海洋新药物资源的开发、利用和推广奠定基础。

技术领域：

本发明涉及一种辽刺参低聚肽对小鼠抗疲劳作用的研究方法，属于生物科技技术领域。

背景技术：

世界上有1400多种海参，分布在潮间带及大洋海底的广大海域，其中热带海域种类丰富。刺参分布在中国的江苏连云港以北海域，是中国20多种食用海参中质量最好的一种。其中，辽刺参又被认为是传统的中医滋补品，海参中的极品。早在明代的《食物本草》中就指出海参有主补元气、滋益五脏六腑和袪虚损的养生功能。

关于海参养生机理方面的很多研究证实，海参所含的蛋白质发挥了重要功效。海参体壁中含有一种羟基赖氨酸糖肽类物质，它的羟基赖氨酸都位于Gly-X-Y三肽的Y位置，且分布于整个肽链，这是与脊椎动物皮与骨中的蛋白质截然不同的。其次，海参蛋白中甘氨酸含量丰富，相伴有羟脯氨酸和羟赖氨酸存在，这是生血、养血(血红蛋白和球蛋白的生物合成)和促进钙吸收的物质基础。

肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，其中由2～10个氨基酸组成的肽称为低聚肽或寡肽，由10个以上氨基酸组成的肽称为多肽。大分子肽进入人体后，需要经过二次酶解；相对于大分子肽，低聚肽可以不通过载体直接以完整的形式被小肠上皮细胞完全吸收，且能与钙、铁、锌等微量元素络合，促进微量元素的吸收。与氨基酸相比低聚肽的吸收能耗底，并且可以避免氨基酸之间的吸收竞争。

随着海参精深加工产业的发展，海参蛋白被水解成肽，研究证实海参肽具有良好的溶解性、稳定性和低粘度等优点。与普通的海参制品相比，海参肽无抗原性，食用更为安全。目前市面上虽然已有部分海参肽产品，但由于酶解工艺的不同导致产品质量参差不齐。研究发现，海参肽具有降血压、抗氧化、提高免疫力、保护人体表皮细胞，防止黑色素沉淀、抗衰老等诸多功能，对于改善健康极为有利。但是海参低聚肽相关方面的研究有限。

发明内容：

针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种辽刺参低聚肽对小鼠抗疲劳作用的研究方法。

本发明的辽刺参低聚肽对小鼠抗疲劳作用的研究方法，具体步骤如下：

(1)先对辽刺参低聚肽分子量进行检测：将样品送江南大学分析测试中心依据GB/T22729-2008采用高效凝胶过滤色谱法分析肽段分子量；

(2)实验分组及灌胃剂量选择：选择昆明种小鼠240只，雄性，体重20±2g，随机分为8组，每组30只，每组小鼠做如下处理：10只用于小鼠负重游泳，10只用于测定血清尿素氮，10只用于测定肝糖原，将8组小鼠进行以下试验分组，分别为阴性对照组；辽刺参低聚肽高剂量组；辽刺参低聚肽中剂量组；辽刺参低聚肽低剂量组；大豆低聚肽中剂量组；大豆低聚肽低剂量组；辽刺参粉高剂量组；辽刺参粉低剂量组；采用人体推荐用量的20倍、10倍和5倍分别作为高、中、低剂量组的灌胃剂量，依次为0.5g/kg、0.17g/kg、0.085g/kg，其中阴性对照组灌胃蒸馏水，各组小鼠每日灌胃1次，连续灌胃30d；

(3)负重游泳实验：末次灌胃30min后，在小鼠尾部负7％体重的铅皮，放入水温25℃的游泳箱，游泳箱尺寸为100cm×100cm×80cm，水深不低于30cm，用秒表记录小鼠自游泳开始至溺亡的时间；