[发明专利]一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法

权利要求书

1.一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）化橘红叶粉末制备：摘取化橘红嫩叶，50～60℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40～60目筛，得粉末备用；

（2）柱层析法提取：叶粉末用乙醇溶液湿样上柱，用相同浓度乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得化橘红叶的乙醇提取物浸膏；

（3）有机溶剂萃取除去叶色素：浸膏转移到分液漏斗，分3次用水洗涤烧瓶，合并到分液漏斗，用等体积正丁醇-石油醚混合液萃取去上层液，重复3次，得下层溶液混合物及沉淀；

（4）水洗去除水溶性杂质：上述所得下层部分转置4℃冰箱静置12～20h，用冷水洗涤离心，去除水溶性多糖和蛋白质杂质，得粗产品；

（5）反相高效液相制备色谱精制：粗产品混合物以甲醇-水溶液溶解，0.22μm微孔滤膜过滤，以反相高效液相制备色谱仪分离，甲醇-水溶液为洗脱系统，325nm检测，分别收集制备色谱中的两个色谱峰物质，减压回收溶剂，48～52℃恒温真空干燥22～26h，即得野漆树苷和柚皮苷两个化学对照品。

2.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的嫩叶是抽出10～20天的嫩叶。

3.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（2）中层析柱直径为2～8cm，上样的高径比为9～11，洗脱液体积浓度为70～95%，收集洗脱液体积3～8倍量，减压温度45～80℃。

4.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（3）中正丁醇-石油醚混合液其体积比为0.5～1.5：9.5～8.5，萃取3～4次。

5.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（4）中水洗去除水溶性杂质时，用水量是样品体积2～4倍，离心转速4000～10000r/min，重复3次。

6.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（5）中野漆树苷和柚皮苷的混合物以60％的甲醇溶解，样品浓度为20～30mg/mL，反相高效液相制备色谱柱为ODS-C18。

7.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，反相高效制备液相进样体积为1～4mL，流速为10～15mL/min，流动相为甲醇-水溶液，梯度洗脱，时间程序：30%甲醇（0~5min），30~50%甲醇（5~25min）。

8.根据权利要求1所述的同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，收集保留时间分别为13.5min和20.0min的馏分。