[发明专利]一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物制备技术领域，具体是一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法。

背景技术

野漆树苷（Rhoifolin），是类黄酮化合物，来源于沽油科山香圆的干燥叶和芸香科植物果实，药理作用：抗氧化，抗肿瘤，抗高血压，黄嘌呤氧化酶抑制剂，由于是黄嘌呤氧化酶抑制剂，可以有效抑制体内尿酸的生成，因而是开发治疗痛风新药的特效成分。

柚皮苷（Naringin）是一种双氢黄酮类化合物，有苦味，天然存在于芸香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中，也是骨碎补、枳实、枳壳、化橘红等中药的主要有效成分之一。柚皮苷具有多方面的生物活性，例如：抗氧化作用、抗癌作用、抗炎作用、抑菌作用和降血脂等作用。

目前，对相关天然产物的提取分离，药物生理活性的研究，药量药效质量控制，需要检测野漆树苷和柚皮苷的含量，因而需要使用对照品，由于柚皮柚普遍存在，对照品容易获得，价格一般（65元/20mg），野漆树苷植物来源少，其对照品价格昂贵，1300元/20mg，是柚皮苷价格的20倍。目前，野漆树苷的来源主要为中药山香圆叶或芸香科毛橘红果实，它们的含量均比较低，只占干物质的0.1～0.6％，提取分离困难，在化橘红果实中，野漆树苷不足柚皮苷的5%，而且野漆树苷与柚皮苷结构与性质高度相似，因而在提取分离中难以分开，要得到纯度高的野漆树难度更大，化橘红叶中的野漆树苷含量较高，是果实中的十几倍，叶龄越小，野漆树苷和柚皮苷的比例越大，野漆树苷含量甚至比柚皮苷的高，两者的总和占干物质量可达13%以上。

溶剂法从化橘叶中提取野漆树苷，通过液液萃取分离去除叶绿素和柚皮苷，再通过结晶和重结晶可得到纯度高的野漆树苷，但是要把大量的柚皮苷去除，工艺复杂，有机溶剂用量大，得率低，成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明从中药化橘红叶中同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品，包括化橘红叶经柱层析乙醇溶液提取、正丁醇-石油醚混合液萃取、水洗去除水溶性杂质、反相高效液相制备色谱精制四个步骤，从而得到野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品。两种对照品的结构如下：

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种同时制备野漆树苷和柚皮苷两种化学对照品的方法，步骤如下：

（1）化橘红叶粉末制备：摘取化橘红嫩叶，50～60℃烘箱烘干至恒重，粉碎过40～60目筛，得粉末备用；

（2）柱层析法提取：叶粉末用乙醇溶液湿样上柱，用相同浓度乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得化橘红叶的乙醇提取物浸膏；

（3）有机溶剂萃取除去叶色素：浸膏转移到分液漏斗，分3次用水洗涤烧瓶，合并到分液漏斗，用等体积正丁醇-石油醚混合液萃取去上层液，重复3次，得下层溶液混合物及沉淀；

（4）水洗去除水溶性杂质：上述所得下层部分转置4℃冰箱静置12～20h，用冷水洗涤离心，去除水溶性多糖和蛋白质杂质，得粗产品；

（5）反相高效液相制备色谱精制：粗产品混合物以甲醇-水溶液溶解，0.22μm微孔滤膜过滤，以反相高效液相制备色谱仪分离，甲醇-水溶液为洗脱系统，325nm检测，分别收集制备色谱中的两个色谱峰物质，减压回收溶剂，48～52℃恒温真空干燥22～26h，即得野漆树苷和柚皮苷两个化学对照品。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（1）中的嫩叶是抽出10～20天的嫩叶。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（2）中层析柱直径为2～8cm，上样的高径比为9～11，洗脱液体积浓度为70～95%，收集洗脱液体积3～8倍量，减压温度45～80℃。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（3）中正丁醇-石油醚混合液其体积比为0.5～1.5：9.5～8.5，萃取3～4次。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（4）中水洗去除水溶性杂质时，用水量是样品体积2～4倍，离心转速4000～10000r/min，重复3次。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（5）中野漆树苷和柚皮苷的混合物以60％的甲醇溶解，样品浓度为20～30mg/mL，反相高效液相制备色谱柱为ODS-C18。

作为本发明进一步的方案：所述步骤（5）中，反相高效制备液相进样体积为1～4mL，流速为10～15mL/min，流动相为甲醇-水溶液，梯度洗脱，时间程序：30%甲醇（0～5min），30～50%甲醇（5～25min）。