[发明专利]一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液及应用

说明书

本发明公开了一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液，其特征在于：此培养液在基础培养液的基础上，添加了肝脱细胞基质溶液，并补充了胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、地塞米松及胎牛血清。此培养液用于肝细胞的体外培养，可促进肝细胞的增殖，并提高肝细胞的活性及功能。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液。

背景技术

肝脏是人体重要的代谢器官之一，具有代谢，生物转化，蛋白合成，解毒以及免疫等多种功能。体外肝细胞培养可用于肝脏药物的毒性研究，也可为肝细胞组织工程等提供种子细胞。然而在体外培养条件下，肝细胞所具有的极性会很快丧失，其合成，代谢等生理功能难以维持。因此如何大量获得并维持较高功能肝细胞是体外培养所面临的关键问题。

有研究表明，在肝细胞的培养液中添加一些成分可以起到促进肝细胞生长以及提高功能的作用：胰岛素可以通过作用于肝表面的受体从而增强肝细胞对葡萄糖的摄取及利用，增强肝细胞活力与功能；转铁蛋白可以结合铁及微量元素，调节肝细胞的生长增殖与功能表达；亚硒酸钠可以保护肝细胞免受氧化应激；地塞米松、胰高血糖素参与肝细胞的糖类及脂类代谢。

然而，体内肝细胞的功能受到肝组织微环境的密切调控，肝组织微环境是含有多种细胞因子、细胞外基质成分以及细胞与细胞之间相互作用的三维环境。肝组织微环境中含有重要的细胞外基质成份，如不同类型的胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白以及多种糖胺聚糖等，这些基质成分除了起到支持作用外，还通过整合素等重要信号对肝细胞的增殖和功能起到重要的调控作用。这些作用是单凭添加胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、地塞米松等成分所不能代替的。

为了进一步模拟肝细胞的体内生长环境，克服目前肝细胞培养液与体内差异过大的问题，本发明制备了一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液，此培养液是在基础培养液的基础上添加肝脱细胞基质溶液，并补充胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、地塞米松及胎牛血清。此培养液可促进肝细胞的增殖，并提高肝细胞的活性及功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液，其特征在于：此培养液在基础培养液的基础上，添加了肝脱细胞基质溶液，并补充了胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、地塞米松及胎牛血清。

此培养液用于肝细胞的体外培养，可促进肝细胞的增殖，并提高肝细胞的活性及功能。

本发明上述方法通过以下具体技术方案予以实现：

一种含有肝脱细胞基质成分的肝细胞培养液，其特征在于：此培养液在基础培养液的基础上，添加了肝脱细胞基质溶液，并补充了胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、地塞米松及胎牛血清；

所述基础培养液为DMEM培养液、F12培养液、DMEM/F12培养液、MEM培养液中的一种或二种以上的混合液；

所述培养液中肝脱细胞基质溶液的浓度为5-30％(v/v)；

所述培养液中胰岛素的浓度为5-100μg/L；

所述培养液中转铁蛋白的浓度为1-10mg/L；

所述培养液中亚硒酸钠的浓度为2-10μg/L；

所述培养液中地塞米松的浓度为0.1-10μg/L；

所述培养液中胎牛血清的浓度为5-20％(v/v)。

所述肝脱细胞基质溶液为动物肝脏经过加工制成；所述肝脱细胞基质溶液的制备包括以下两个过程：