[发明专利]菌根真菌在金线莲大面积栽培技术

说明书

本发明公开了一种菌根真菌在金线莲大面积栽培中的应用技术，所用的4种菌根真菌为小菇属真菌：石斛小菇，紫萁小菇，兰小菇，开唇兰小菇；先分别培养菌根真菌和金线莲苗，当金线莲苗移栽到大田时，加入菌根真菌与金线莲苗共同栽培。采用该项新技术，可大大缩短金线莲的生长周期，提高金线莲产量和有效成分含量。该项技术栽培方法简单、易于大面积推广、投资少、不施任何化学肥料、激素和农药，生产出的金线莲为绿色产品。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说涉及一项在金线莲大面积栽培中应用菌根真菌以缩短金线莲生产周期，提高金线莲产量和质量的技术方法。

背景技术

金线莲是一种名贵珍稀的中草药，为兰科开唇兰属(金线莲属)(AnoectochilusBlume)多年生草本植物，在我国主要分布于浙江、福建、江西、广东、广西、海南、贵州、云南、西藏、台湾等省区。金线莲是全草入药，具有清热凉血、祛风利湿、强心、降血压、解毒、止痛、镇咳等功效，民间多用于消炎、镇痛，治疗肺结核、肺热咳嗽，风湿性关节炎、小儿惊风、跌打损伤、蛇伤等多种疾病，均有很好疗效。近年来，金线莲又被用于治疗高血压、糖尿病、肝炎及肿瘤等疑难病症，其功效日益引起医药界的重视。金线莲在民间素有“金草”、“神药”、“乌人参”等美称，在台湾更是被称为“药王”。经测定发现，金线莲中氨基酸类成分的组成和含量，以及具有抗衰老活性的微量元素的含量均高于西洋参。

发明内容

本发明地目的在于提供一种应用菌根真菌大面积栽培金线莲的方法，该方法可以提高金线莲的繁殖率和栽培成活率，可以缩短栽培金线莲的生长周期，提高金线莲的产量和质量，解决金线莲资源短缺的问题。

具体地说，本发明所述技术的步骤方法如下(除有特殊说明外，本发明中所述的比例均为重量百分比)：

1.菌根真菌的培养

将上述4种菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于22-28℃恒温培养10-20天，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基中分别进行发酵培养制成种子菌种；种子菌种可以进一步接入液体或固体培养基进行放大培养。

真菌液体培养的培养基含有葡萄糖、无机盐类成分和天然添加物，其中葡萄糖的加入量为1.5-4％；无机盐类成分可以为硫酸镁，磷酸二氢钾，或磷酸氢二钾，或磷酸二氢钾和磷酸氢二钾以任意比例混合的混合物，其加入量为硫酸镁0.1-0.3％，磷酸二氢钾0.1-0.5％，或磷酸氢二钾0.1-0.5％，或磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的混合物0.1-0.5％；天然添加物可以为麦麸(煮汁)，其加入量为2-5％。培养基pH 5.0-6.5。三角瓶或其他容器振荡培养或发酵罐通气培养，培养容器装量10-60％。培养基灭菌后接入上述菌根真菌，种子菌种接种量为培养容器装量的5-20％。菌根真菌液体培养的培养条件为：振荡转速80-150转/分钟，18-28℃暗培养10-30天。培养结束后可直接使用或用匀浆机打碎培养产物备用。

菌根真菌固体培养的培养基中天然纤维性或淀粉性物质可以为阔叶树锯末、麦麸和碎玉米粒，这3种原料加入量之间的比例按重量计为：阔叶树锯末∶麦麸∶碎玉米粒＝0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.2-1.5。固体培养基的加水量为以上3种原料总重量的1-4倍。培养基pH5.0-6.5。试管、玻璃罐头瓶或塑料袋等器皿静置培养，培养容器装量50-80％。培养基灭菌后接入液体培养的小菇属真菌的种子菌种，种子菌种的接种量为培养容器装量的5-15％。固体培养的培养条件为：18-28℃暗培养，待菌丝从培养基顶部长入底部或长满培养基时(2个月左右)取出备用。

2.金线莲苗的培养

金线莲带有节的茎段经过芽分化、丛芽增殖、壮苗生根等步骤的培养，培育成苗。经壮苗生根培养后的金线莲苗可以在继代培养基上继代培养。各步骤所用培养基及培养时间分别为：