[发明专利]一种酪氨酸磷酸酶抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种酪氨酸磷酸酶抗体化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：纯化的酪氨酸磷酸酶包被的磁微粒工作液、吖啶酯标记的纯化的酪氨酸磷酸酶工作液、酪氨酸磷酸酶抗体定标品、预激发液、激发液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶包被的固相载体为磁微粒。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶包被的固相载体为羧基化的粒径为0.05-1um磁微粒。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物优选吖啶酯。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包括化学发光激发液、化学发光预激发液。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光预激发液为质量分数0.005% ~ 0.5%的双氧水(H₂O₂)溶液，激发液为0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶抗体定标品为用标准品缓冲液将酪氨酸磷酸酶抗体配制成浓度为5 IU/mL、25 IU/mL 、100 IU/mL、500 IU/mL 、1000 IU/mL 、4000 IU/mL ，分装冻干，4 ℃保存备用。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括酪氨酸磷酸酶包被的磁微粒的制备、酪氨酸磷酸酶标记的吖啶酯的制备、化学发光底物液的制备、酪氨酸磷酸酶抗体定标品的制备。

10.根据权利要求1和权利要求9所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）酪氨酸磷酸酶包被的磁微粒的制备：

取羧基化的纳米磁珠悬浮液，磁分离去上清，MES缓冲液重悬，加入EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入酪氨酸磷酸酶，室温下混悬2-10 h，磁分离，去除上清， Tris缓冲液重悬，得到酪氨酸磷酸酶包被的磁微粒；可选的，羧基化纳米磁珠直径为0.1μm ~ 2.0μm；

MES缓冲液浓度为10mM ~ 100mM，pH 5.5 ~ 8.5；

2）吖啶酯标记的酪氨酸磷酸酶制备：

取酪氨酸磷酸酶，加入碳酸盐缓冲液，混匀，然后加入吖啶酯混匀，室温下避光反应，1-2 h后取出，离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先分别用纯净水及TBS缓冲液进行处理，最后加入得到的酪氨酸磷酸酶标记的吖啶酯溶液，收集离心管中的液体至保存管得到酪氨酸磷酸酶标记的吖啶酯；

3）酪氨酸磷酸酶抗体定标品的制备：

用标准品缓冲液将酪氨酸磷酸酶抗体配置成浓度为5 IU/mL、25 IU/mL 、100 IU/mL、500 IU/mL 、1000 IU/mL 、4000 IU/mL ，分装冻干，4 ℃保存备用；

4）化学发光预激发液的制备：

量取1.0升纯化水，依次加入0.5 ~100μL质量分数为20%的双氧水(H₂O₂)、0.5 ~ 5克防腐剂、0.5 ~ 5克表面活性剂，摇匀后避光存放；可选的，防腐剂为商品化叠氮化钠、PC300，表面活性剂为吐温20、吐温80、Triton X-100、Triton X -405；

5）化学发光激发液的制备：

量取1.0升纯化水，依次加入0.2 ~ 1克氢氧化钠、0.5 ~ 5克防腐剂、0.5 ~ 5克表面活性剂，摇匀后避光存放；可选的，防腐剂为商品化叠氮化钠、PC300，表面活性剂为吐温20、吐温80、Triton X-100、Triton X-405。