[发明专利]美洲大蠊wingless基因全长鉴定及应用有效

专利信息
申请号: 201611019059.0 申请日: 2016-11-17
公开(公告)号: CN106854650B 公开(公告)日: 2018-06-12
发明(设计)人: 陈婉;胡超超 申请(专利权)人: 江苏开放大学
主分类号: C12N15/12 分类号: C12N15/12;C07K14/435;C12N15/10;C12Q1/6888;C12N15/11;A01N37/46;A01P7/04
代理公司: 南京钟山专利代理有限公司 32252 代理人: 戴朝荣;宁菁
地址: 210036 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 美洲大蠊 蛋白 应用 位点 基因 克隆 蛋白质氨基酸序列 基因全长cDNA 基因序列编码 氨基酸序列 核苷酸序列 开放阅读框 亲水性蛋白 糖基化位点 编码蛋白 基因全长 酶切位点 生物探针 天冬酰胺 等电点 杀虫剂 信号肽 蟑螂 氨基酸 碱基 制备 登录 研究
【说明书】:

发明提供了美洲大蠊wingless基因全长cDNA、其编码蛋白、以及其克隆方法及应用。所述基因命名为PaWg,其GenBank数据库登录号为KJ680328;所述的cDNA全长序列共1,456bp,其开放阅读框(ORF)包含1,194个碱基,编码397个氨基酸,其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。该基因序列编码的蛋白质氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。该蛋白的理论等电点PI为9.46,分子量为4.4kD,是个稳定的亲水性蛋白。该蛋白的第1‑21位氨基酸序列是一段信号肽,位点21与22之间存在一个酶切位点。同时该蛋白可能包含2个N‑糖基化位点,分别在107和343位点的天冬酰胺上。本发明提供了该基因、蛋白以及其克隆方法在制备蟑螂杀虫剂以及生物探针方面的应用,为美洲大蠊wingless基因相关研究与应用奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种基因的克隆与功能鉴定,尤其涉及美洲大蠊wingless基因全长克隆与功能鉴定及应用,属于生物技术领域。

背景技术

美洲大蠊是中国南方地区最常见的蜚蠊,能进入室内危害,是优势卫生害虫之一。它们能在室内的任何地方被发现,如脏的床垫、床单表明,软垫的家具,地毯,它们在厨房里活动频繁[1]。目前,化学防治仍是蟑螂防治的一项重要手段。随着化学杀虫剂的大量使用,蟑螂迅速产生了抗药性,并且越来越严重[2]。同时由于化学杀虫剂的使用,会生态环境产生的严重的影响和破坏作用。因此,利用分子生物信息技术来防制蟑螂具有非常广阔的应用前景[3]。目前,已有多种昆虫基因被报道对杀虫剂的效果起到一定的调控作用,如重组的HaSNPV几丁质酶有望作为Bt杀虫剂的增效剂[4],昆虫的钠离子通道基因对杀虫剂抗性具有一定的影响机制[5],中华按蚊CYP6基因家族中的多个基因均对杀虫剂的抗药性起到一定的调控作用[6]等。

Wnt基因在1982年被Nusse和他的团队[7]首次报道,当时被命名为int-1基因,这个基因的非正常激活会诱发癌症。随后在果蝇中发现了与int-1同源的基因wingless基因(wg),它们被共同定义为“wnt”基因[8]。Wnt基因家族的成员在多个物种中被检测出来,从无脊椎的线虫至脊椎动物,在人中共发现了19个wnt家族的基因[9],在果蝇中发现了7个wnt家族的基因,蜂中发现了7个wnt家族的基因,蚊中发现了6个wnt家族的基因,在赤拟谷盗中发现了9个wnt家族的基因[10][11]。Wnt家族的基因编码一个大的分泌半胱氨酸-富集蛋白家族,在动物发育中作为细胞间信号分子发挥重要的作用。许多wnt蛋白由350至380个氨基酸组成,有100多个保守的残基分散在整个序列中。这些蛋白的起始处是一条疏水信号的序列,接着是一段可以被识别到的信号肽。每个蛋白都有一至多个N-糖基化位点以及多达24个半胱氨酸残基形成二硫键[12]。通过自分泌或旁分泌途径,wnt配体结合至各种跨膜受体上,驱动wnt信号传导途径,从而触发靶标基因在细胞间的调控转录。

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