[发明专利]一种检测细胞衰老的方法

说明书

本发明公开了一种检测细胞衰老的方法，将染料食品红104(英文名Phloxin B，CAS：18472‑87‑2)结合到待检测细胞中，形成细胞‑‑染料复合物，加以检测。包括以下步骤：a)染料储液制备：将Phloxin B配制成1mg/ml的储液；b)细胞培养：将裂殖酵母菌株活化接种于YES平板，培养2‑3天后制备饱和过夜培养液，取菌液稀释于液体YES培养基中培养；c)细胞‑‑染料复合物制备：细胞培养到指定时间点，取菌液加入Phloxin B染料，避光染色细胞；d)细胞‑‑染料复合物检测：将染色后的细胞用PBS洗3次后，荧光显微镜下观察，统计死活细胞比例，得出存活率。本发明方法具有工艺简单、检测成本低、检测效率高等优点。

技术领域：

本发明属于生命科学应用领域，是一种衰老检测新方法。尤其是一种荧光染料食品红104(英文名Phloxin B)结合到待检测裂殖酵母细胞中，形成细胞--染料复合物，加以检测。

背景技术：

酵母细胞有多种类型，包括芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)，裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、白假丝酵母(Candida albicans)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)和新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)。在过去的十几年里，酵母作为模式生物在衰老研究中发挥重要作用，其中芽殖酵母作为研究的先驱者对阐明一系列重要分子机制，理解细胞衰老，以及发现新的长寿基因十分有用，它已经被证明，无论是在研究复制寿命上还是时序寿命上，均是一个非常重要的模式生物，人们已经利用它发现了许多衰老相关机制(包括衰老相关基因及相关信号通路)。更重要的是，这些基因被多次证明在多细胞真核生物中是保守的。芽殖酵母作为已经建立的研究衰老的一个理想的模式生物，其具有众多优点：(1)生活周期短，易于培养；(2)遗传背景清楚，酵母作为第一个基因组被测定的真核模式生物，有相对完整的基因组数据库；(3)有充分的遗传学操作方法和手段，易于做遗传学分析。

裂殖酵母是最近新出现的一个用于衰老研究的十分有用的杆状单细胞真核生物，无论是形态学上还是遗传学上，均与现在普遍使用的芽殖酵母有很大的不同。相较于芽殖酵母，它有许多独特的优势。它与哺乳动物共享着一些在芽殖酵母中没有的过程，包括RNAi干扰机制、核结构蛋白和染色质结合蛋白以及着丝粒结合蛋白、mRNA剪接机制、线粒体基因组对生存的需求。所以，裂殖酵母作为一个独特的模式系统可以用来发现新的长寿调控途径，同时兼具芽殖酵母的优点，如便捷的基因组修改和大批量的生长和分析。此外，在裂殖酵母中Wis4/Wis1/Sty1压力响应通路是依赖于mitogen-activated protein(MAP)kinases，这类似于哺乳动物压力响应激活MAP kinases p38和JNK。裂殖酵母与芽殖酵母亲缘关系较远，进化上更接近于人类，拥有许多与人类同源的基因，这为研究人类疾病和衰老的分子机制提供了一些优势。