[发明专利]一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法

权利要求书

1.一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法，其特征在于，包括以下步骤；

S1：探索山牡荆有效成分的最佳提取方法，应用传统提取方法、超声波提取方法、微波提取方法和超临界流体萃取提取方法分别对山牡荆有效成分进行提取，选取最佳的提取方法；

S2：对山牡荆中的有效成分进行分离和纯化，采用有效的分离方法对山牡荆中的有效成分进行分离制备；

S3：将分离出的山牡荆有效成分进行结构鉴定，利用化学手段和现代仪器技术对分离得到的山牡荆各成分进行鉴定；

S4：筛选对山牡荆最敏感的肿瘤细胞和有效的抗肿瘤药物浓度，并进行抗肿瘤细胞实验，配制不同浓度的山牡荆提取物，进行山牡荆体外抗肿瘤活性实验，筛选对山牡荆和单叶蔓荆最为敏感的肿瘤细胞和有效的抗肿瘤药物浓度，并用最敏感的肿瘤细胞进行有效成分抗肿瘤细胞实验，确定抗肿瘤活性成分的抗肿瘤效果；

S5：进行活体抗肿瘤实验；

S6：对化合物进行结构改造，发掘山牡荆抗肿瘤化合物，以活性较好的化合物作为先导化合物，通过进一步的结构简化，考察分子中各结构片段对抗肿瘤活性的影响，并利用化学手段，结合计算机辅助药物设计及构效关系研究，对其进行结构改造，合成大量化合物，结合活性评价，发掘抗肿瘤效果好的山牡荆化合物。

2.根据权利要求1所述的一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法，其特征在于，所述山牡荆中有效成分的分离方法采用色谱分离法，所述色谱分离法包括高效液相制备色谱、中压制备液相色谱和逆流色谱。

3.根据权利要求1所述的一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法，其特征在于，所述活体抗肿瘤实验的具体方法为：选用对山牡荆抗肿瘤成分最敏感的肿瘤细胞构建小鼠肿瘤模型，将山牡荆和单叶蔓荆抗肿瘤成分的高、中、低三个剂量设为实验组，以生理盐水为空白组进行体内抗肿瘤实验，定期监测小鼠皮下瘤体生长情况并对动物进行生存观察，观察结束后，处死小鼠并取动物肿瘤及相关脏器组织进行HE、免疫组化及凋亡染色，分析动物有无系统性损害。