[发明专利]一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学技术领域，尤其涉及一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法。

背景技术

恶性肿瘤是一种严重危害人类健康和生命的疾病，也是世界医学界的重大难题。2008年，全球恶性肿瘤患者1270万人，死亡人数高达760万。世界范围内因恶性肿瘤死亡的人数，比艾滋病、疟疾和结核病加起来还要多。如果不采取有效措施，预计到2030年，每年将出现2600万新增恶性肿瘤病例，死亡人数将达到1700万。我国每年恶性肿瘤的发病人数约为200万，死亡人数超过140万，并有逐年上升的趋势。攻克恶性肿瘤难关已成为医药工作者和化学工作者当务之急的任务。

近年来中药及其有效成分抗肿瘤研究工作取得了一系列的成果，从植物中得到的抗肿瘤成分主要包括生物碱类、萜类、黄酮类、植物多糖类、多酚类、有机酸类和木脂素类等化合物。当今国际上常用的抗肿瘤植物药和辅助化疗的中药主要包括紫杉醇、喜树碱、长春花碱、白藜芦醇、鬼臼毒素等。这些植物药基本上已用于所有种类的癌症的治疗或辅助治疗，如紫杉醇已用于喉癌、卵巢癌，黄芪等用于肝癌、五加多糖用于胃癌，魔芋用于腹水肿瘤，山豆根等用于治疗消化道癌等。

目前，世界上对抗肿瘤药用植物的研究工作已经涉及300余科植物，从植物中筛选出的抗癌活性成分已达617万种。美国国立癌症研究所自1957年以来，每年筛选出1500-5000中植物提取物的抗癌活性成分。中国的中医药具有2500多年的历史，它们在治疗各种疑难杂症中显现出了神奇的疗效。但我国对植物有效成分的提取分离工作开展较晚，目前约对3000余种(占我国植物总数的10％左右)植物进行了有效成分的研究工作，发现不足300种植物有效成分具有抗癌活性，研究较多的有200余种。因此，我们必须加大对中医药的研究力度和深度，力争从植物中获得毒性低而抗肿瘤作用显著的新衍生物。

牡荆属植物Vitex是马鞭草科乔木或灌木，全世界约250种，主要分布于热带和温带地区。我国有14种，7变种，3变型，主要分布在长江以南地区，少数种类在西北、东北、华北等地也有分布。牡荆属植物含有多种化学成分，迄今从该属植物中获得的天然产物类型有黄酮类、二帖类、甾类、环烯醚萜类、三萜类、苯丙素类、倍半萜类等。现代药理研究表明，本属植物所含成分具有多种药理活性，如抗肿瘤、调节内分泌、解热镇痛、抗炎作用、保肝作用、抗氧化作用、抗菌作用、杀虫作用以及呼吸系统活性等。国内外许多研究机构对牡荆属的抗肿瘤作用具有浓厚的兴趣，抗肿瘤活性成为该属植物目前研究的热点之一。该属植物提取物可以通过多种途径抑制肿瘤增殖和诱导肿瘤细胞的凋亡，发挥抗肿瘤活性。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法。

一种山牡荆抗肿瘤化合物的研究方法，包括以下步骤；

S1：探索山牡荆有效成分的最佳提取方法，应用传统提取方法、超声波提取方法、微波提取方法和超临界流体萃取提取方法分别对山牡荆有效成分进行提取，选取最佳的提取方法；

S2：对山牡荆中的有效成分进行分离和纯化，采用有效的分离方法对山牡荆中的有效成分进行分离制备；

S3：将分离出的山牡荆有效成分进行结构鉴定，利用化学手段和现代仪器技术对分离得到的山牡荆各成分进行鉴定；

S4：筛选对山牡荆最敏感的肿瘤细胞和有效的抗肿瘤药物浓度，并进行抗肿瘤细胞实验，配制不同浓度的山牡荆提取物，进行山牡荆体外抗肿瘤活性实验，筛选对山牡荆和单叶蔓荆最为敏感的肿瘤细胞和有效的抗肿瘤药物浓度，并用最敏感的肿瘤细胞进行有效成分抗肿瘤细胞实验，确定抗肿瘤活性成分的抗肿瘤效果；

S5：进行活体抗肿瘤实验；

S6：对化合物进行结构改造，发掘山牡荆抗肿瘤化合物，以活性较好的化合物作为先导化合物，通过进一步的结构简化，考察分子中各结构片段对抗肿瘤活性的影响，并利用化学手段，结合计算机辅助药物设计及构效关系研究，对其进行结构改造，合成大量化合物，结合活性评价，发掘抗肿瘤效果好的山牡荆化合物。

优选的，所述山牡荆中有效成分的分离方法采用色谱分离法，所述色谱分离法包括高效液相制备色谱、中压制备液相色谱和逆流色谱。