[发明专利]面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法

说明书

本发明公开了一种面积归一化法测定西红花药材中西红花苷类成分的方法，建立了西红花药材质量控制方法，分离出12个主要的西红花苷类成分，以相对稳定、价廉的西红花苷‑Ⅰ为内参物，采用面积归一化法对西红花药材中西红花总苷进行含量测定，解决HPLC法测定西红花药材时多个西红花苷类成分的分离以及含量测定时多个西红花苷对照品不易获得的问题。以西红花苷‑Ⅰ为内参物，建立了西红花苷‑Ⅰ对西红花苷‑Ⅱ的相对校正因子，利用相对校正因子计算西红花苷‑Ⅱ的含量；并与药典采用的外标法测定的32批西红花中西红花苷‑Ⅰ和Ⅱ含量进行比较，以验证一测多评法的可行性。解决了药典测定方法中西红花苷‑Ⅱ对照品性质不稳定、价格昂贵的问题。

技术领域

本发明涉及中药活性成分分析技术领域，具体地说，是涉及一测多评法与面积归一化法相结合的测定西红花药材中西红花苷类成分的方法。

背景技术

西红花(Crocus sativus L.)又称藏红花，仅以雌蕊上部三根红色柱头入药，人工采摘100000-150000朵花才能获得一公斤藏红花干品，因此价格昂贵，为名贵中药材，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神之功效。主要有效成分为西红花苷(crocins)，是一种红色的水溶性胡萝卜素类化合物，是西红花酸与葡萄糖或龙胆二糖结合而成的一系列酯苷类，目前已分离得到苷元均为西红花酸的16种不同顺反异构体的西红花苷。世界各地不同来源西红花中均以西红花苷-Ⅰ含量最高，其次为西红花苷-Ⅱ，西红花苷产地栽培、干燥与储存等对西红花苷含量影响很大，因此在西红花生产加工和质量控制方面均需要适当的藏红花苷含量测定方法，《中国药典》2015年版以西红花苷中的西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ为指标对西红花质量控制，要求两者总含量不低于10％，但西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ在某些样品中只占各西红花总苷的70％左右，且随着储存时间的增加，反式的西红花-Ⅰ和苷-Ⅱ会发生降解或异构化，部分转为其他顺式异构体，而西红花苷口服给药后，所有西红花苷均会水解为苷元西红花酸被吸收入血起效，因此西红花总苷含量的高低对药效的影响更大，《中国药典》根据西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的总含量为标准，不能全面反映西红花药材质量；西红花在国际上主要用作色素和香料，作为食品添加剂的国际标准ISO3632-2(2010版)，用分光光度法于λmax 440nm测定西红花水提取液的色价来进行质量控制与分级，规定西红花苷色价大于190为一级品，该方法更不能精确定量西红花苷含量。因此，《中国药典》及国际标准ISO 3632-2对藏红花质量评价的标准均需进一步完善，需要建立适合生产加工和质量控制的西红花总苷含量测定方法。

一般认为分光光度法特征性不强，但西红花是一味很特殊的药材，药效成分均集中于柱头，含量高且相对简单，主要只有藏红花苷、藏花醛和苦藏花素三类成分，在可见光区440nm处只有西红花苷类有吸收，其他成分无干扰，用可见分光光度法(440nm)测定总西红花苷含量的方法，方法简便，易于推广，但该方法只适合生产加工者使用，若有人为掺假等行为，则不适合使用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对《中国药典》仅测定西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量，不能全面体现总西红花苷的真实含量，《国际标准》测定的总西红花苷色价不能量化总西红花苷的含量的缺点。本发明将一测多评测定的两种西红花苷含量和面积归一化法测定的总西红花苷含量相结合，实现了一个对照品完成各西红花苷类成分的含量测定，降低了检测成本，并能全面评价西红花的质量，为西红花药材质量评价方法的完善提供了更好的技术参考。

本发明采用高效液相法，通过优选色谱条件，波长切换等技术测定药材中的西红花苷，可分离大部分西红花苷类成分，但西红花苷的苷元由七个共轭双键组成，易氧化不稳定，因此西红花苷对照品价格昂贵，精确定量所有西红花苷类成分含量，检测成本非常昂贵，本发明使用采用面积归一化法(ANM)对西红花药材中西红花总苷进行含量测定，解决了HPLC法含量测定时多个西红花苷对照品不易获得的问题。